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巧克力平板培養基是一種微生物培養基，在醫學和生物研究等方面已經被廣泛使用。巧克力平板主要是用于奈瑟氏菌屬和嗜血桿菌等需氧菌的分離和培養。主要是蛋白胨和牛肉粉用來提供細菌生長所需的碳源、氮源氨基酸以及維生素。氯化鈉維持培養基中的滲透壓，瓊脂用做凝固劑。脫纖維羊血提供氯化血紅素和輔酶I，為嗜血桿菌屬的生長提供特殊營養。
巧克力平板培養基還能夠培養其他細菌，主要的原因還有血液中有V、X因子，這兩種因子是位于紅細胞中的，一般細菌不能利用，輕微的加熱（一般為75~85攝氏度左右）使紅細胞破壞釋放到細胞外方可利用。
巧克力培養基用途主要用于嗜血桿菌的分離，亦可用于奈瑟菌的增菌培養。原理流感嗜血桿菌培養時，需要依賴血液中的X及V因子方能生長繁殖，當培養基加熱至80～90℃時，可使血液中的紅細胞破裂，以利于嗜血桿菌，奈瑟菌等的生長培養。凡疑有這些菌種存在的標本，均應接種巧克力平板。血液標本培養，增菌后又細菌生長，若移種巧克力平板上，有利于分離更多的細菌。成分牛肉浸出液1L蛋白胨10氯化鈉5瓊脂15無菌脫纖維馬血、羊血或兔血100mlpH7.2～7.4
制備將前四項成分混合，加熱溶化，校對pH，高壓滅菌（121℃15min）后在80～90℃以無菌方法加入血液，搖勻后置90℃水浴中。維持該溫度15min，使之呈巧克力色取出，至室溫冷至約50℃，傾制平板 。凝固后，抽樣置于35℃培養18～24h，如無細菌生長，冷藏備用。接種將可疑標本直接劃線接種于該培養基上，置35℃普通培養或置含5%～10%二氧化碳環境培養18～24h，取出觀察細菌生長狀況。觀察結果流感嗜血桿菌菌落微小(0.8mm),無色透明、光滑整齊、似露滴狀，48h后達1.5mm，從血液或腦脊液中分離的菌落往往形成液狀，菌落較大，老培養物菌落中心呈凹陷。質量控制流感嗜血桿菌ATCC10211，生長良好，菌落典型。肺炎鏈球菌，ATCC6305，生長良好，菌落典型。
保存置冰箱，1周內用完。
平板培養基制作方法如下：
?、?將培養皿洗凈、干燥，使各培養皿蓋方向一致，用牛皮紙包好，或放入特制鐵罐內，注明皿蓋的方向。高壓滅菌或干燥滅菌后備用。
?、?取剛滅菌后尚未凝固的培養基置于無菌箱或超凈工作臺內，略打開滅菌過的培養皿蓋(露一小縫)，倒入培養基(厚度為0.5cm)，封蓋、冷凝，倒置備用。
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