PCR實驗室中輔料的質檢應結合實際工作中可能用到的場景,并非越苛刻越好,需要每個實驗室結合自身情況來設計和調整文中提到的參數。
離心管:
(1)滲漏密閉性:將n個離心管加入半量墨汁,蓋好蓋子后放入水中,浸泡30min,沒有墨汁滲出為合格。
(2)離心密閉性:將n個離心管加入半量純水,放入離心機,10000 rpm,30min,管蓋未崩開未漏液為合格。
(3)熱密閉性:將n個離心管加入半量純水,蓋好蓋子稱重后放入金屬浴中,65℃或90℃(巴氏消毒),30min,再進行稱重,離心管未變形,管蓋未崩開未漏液,前后重量未變化為合格。。
(4)冷密閉性:將n個離心管加入半量純水,放入-20℃冰箱,24h,離心管未變形,管蓋未崩開未漏液為合格。
(5)污染物質檢:將n個離心管分別加入半量陰性純水,蓋好蓋子渦旋1 min后靜置5min,吸取純水作為模板進行擴增,qPCR無擴增為合格。
(6)抑制物質檢:將n個離心管分別加入弱陽性質控物,室溫靜置5min,然后進行提取;RNA核酸,DNA核酸,室溫靜置5min,作為模板進行擴增,qPCR擴增未被抑制為合格。
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