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質譜的常見問題

來源:蘇州邦鑫電子技術有限公司   2021年08月16日 09:54  

1、質譜不出峰的可能原因?

答:

1)進樣系統與離子源沒連接或有漏液

2)六通閥漏液

3)霧化氣沒開

4)噴霧電壓沒有

5)離子進入分析器的離子通道堵塞

6)噴霧毛細管堵塞

2、如何根據樣品選擇離子源?

答:可根據分子量的大小、極性。APCI適合小分子,極性小的化合物;ESI適合分析的分子量范圍較大、分子要求帶有一定極性。一般先考慮用ESI分析,如果極性實在太小,才想到用APCI。

3、等度還是梯度洗脫如何選擇?

答:其實只做一兩個化合物,是等度洗脫好,速度快,但也并非越快越好,特別在分析生物樣品時,考慮到基質效應,保留因子控制在2-3左右較好。梯度洗脫適合分析多個結構不同的物質,如化合物與代謝產物一同鑒定的時候,比如苷和苷元的一同測定。另外很多做合成化學的分析實驗室用的也是一通用的梯度洗脫方法,一個方法搞定大部分樣品。一般來說對于組成簡單的樣品可以采用等度洗脫,而對于那些復雜的樣品分離通常需要進行梯度洗脫。

4、氣質和液質系統對比

答:除了采用的分離手段不同(氣相和液相)外主要的區別在于真空系統和電離方式。氣質的真空系統比較簡單,只要一個小的機械泵和一個分子渦輪泵就可以了。液質的機械泵要比氣質大,需要兩個分子渦輪泵。氣質的電離方式有電子電離(EI)和化學電離(CI)。液質的電離方式有電噴霧電離(ESI)、大氣壓化學電離(APCI)和大氣壓光電離(APPI)。

5、APCI和ESI的不同點?




答:

1)離子產生的方式不同。APCI利用電暈放電離子化,氣相離子化。ESI利用離子蒸發,液相離子化。

2)能被分析的化合物類型不同。APCI適合弱極性,小分子化合物,且具有一定的揮發性;ESI 極性化合物和生物大分子。

3)流速不同。ESI一般流速較小,約0.001到0.25 mL/min,APCI 相對較大,約0.2到2 mL/min。

4)多電荷。APCI不能生成一系列多電荷離子,所以不適合分析大分子;ESI 能生成一系列多電荷離子,特別適用于蛋白,多肽類等生物分子。

6、CID和CAD區別?

答:CID(collision-induced dissociation),碰撞誘導解離。通常在真空接口處調節電壓發生CID現象,一般是去除溶劑,如果電壓增大,也會產生碎片離子。這是yi級質譜的原理。CAD(collision-activated dissociation) 碰撞活化解離。 做二級質譜時,選擇的母離子進入Q2后,碰撞活化產生子離子,這個過程稱為 CAD。以API3200譜儀為例,CID指的是Q0里面的誘導碰撞的氣體,CAD指的是Q3里面的誘導碰撞氣體。也就是說,在這里的CID&CAD都是指氮氣。

7、氮氣發生器該使用嗎?

答:氮氣發生器的工作原理是分離空氣,電解膜的負極側發生氧化反應,“吃掉”空氣中的氧化性氣體,在正極側還原,空氣流過電解池后就只剩下氮氣和惰性氣體。故國內發生器的純度大多標有“相對含氧量”。氮氣的純度和空氣流速、有效分解面的長度、電解電勢的強弱都有關系。這種分離方法也決定了氮氣的純度不可能做的很高。加入電解質的作用就是提高水的導電率,使電化學反應能順利進行。發生器對質譜的影響有一點常常被忽略,就是發生器內的開關電源工作時會對電網電壓造成一定的干擾(壓縮機的啟動和停止也會)。

8、串聯質譜如何定量?

答:串聯質譜定量時,是以后面產生的碎片峰(子離子)定量。但是這一子離子是由母離子在碰撞室產生的特征性碎片,所以用MRM定量靈敏度會比用SIM定量好很多。建立方法的步驟是:用一定溶度的標準品溶液(1-10 ug/mL)調諧化合物的yi級質譜條件,找到母離子的zui佳質譜條件。然后對母離子進行打碎,優化碰撞能量,得到其特征性的子離子。zui后利用該質譜條件和該母離子->子離子對進行定量。

9、質量偏差怎么辦?

答:質譜的質量數偏了,說明你的儀器該校正了,一般3個月就要校一次機。一般每個廠家都會隨機帶有校正液。

10、如何更換機械泵油?

答:一般3個月到半年更換一次泵油,可同時停機對儀器進行一次清洗。更換泵油的時候,先開啟振氣閥5-10分鐘,待將泵內沉淀振起后,關閉振氣閥,同時關閉電源。打開泵下的泵油排放閥門,放掉舊油。如果泵油已經很臟,則可取少許新油清洗泵后放掉再注入新油。

11、產生碰裝室離子交互影響(Collision Cell Cross Talk)的原因及消除?


答:多通道掃描(MRM)時,如果兩個離子掃描通道的碎片離子一樣(或類似如相差1-2分子量單位),前一個離子通道掃描結束后,碰裝室里的離子來不及清除,影響下一個離子通道反應的定量(如果色譜分離*則無此影響)。

可能的消除方法:

1)選擇特異的子離子(特別是在用穩定同位素內標時)

2)增加離子通道掃描反應之間的時間間隔(如100 ms→300 ms)

3)可設置額外的“無用的離子掃描通道(dummy MRM)”

12、排除色譜柱流失問題的zui佳方法是什么?

答:診斷色譜柱是否存在流失問題的方法是第yi次在方法條件下安裝色譜柱時,做一次空白色譜圖,然后將*近的運行和空白運行色譜圖對比。如果在空白運行中產生了很多峰,則色譜柱性能改變,這可能是由于載氣中含有氧氣,也可能是由于樣品殘留。如果有 GC-MS,則低極性色譜柱的典型流失離子(例如 DB/HP-1或5)質/荷比m/z 將為 207、73、281、355 等,大多數為環硅氧烷。

13、譜圖為什么只有溶劑峰?

答:可能有以下原因

1)進樣針損壞

2)載氣流速太低

3)樣品濃度太低

4)樣品被柱或進樣器襯套吸附

14、質譜基線高是什么原因?

答:質譜的基線其實跟液相的紫外檢測器和熒光檢測器一樣,基線高的原因不外乎內部和外部的原因。

1)選擇的流動相在質譜的響應比較高,比如水相比較多的時候,噪音比較大些;還有如果鹽含量比較大的時候,噪音更大些。

2)檢測器的靈敏度越高的時候,噪音應該越高。如果質譜的污染比較嚴重時,基線肯定比較高。比如離子阱檢測器,用得久了,阱中的離子就會增多,一方面降低了質譜的靈敏度,另一方面增加了基線噪音。

3)質譜的基線很多時候還跟你選擇的離子寬度有關。比如作選擇離子掃描的時候,基線就低些。作選擇反應掃描的時候,離子寬度不要選得太寬,太寬噪音就高些。

4)多級質譜一般做二級或三級質譜,基線噪音就低很多。



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