噬菌體展示技術服務平臺
M1 3單鏈絲狀噬菌體展示系統是目前應用*泛的文庫展示系統,通過將蛋白、抗體或多肽與噬菌體llI蛋白融合表達,使之參與噬菌體組裝,并展示在噬菌體表面,形成噬菌體展示文庫。使用噬菌體展示文庫,針對特定靶分子進行3- 5輪親和篩選,可以富集能特異性結合靶分子的噬菌體,得到相應的DNA序列信息.
艾柏森生物目前開發的噬菌體展示技術服務平臺涵蓋了免疫抗體庫、天然抗體庫等常用的文庫類型,可根據客戶的特殊需求定制個性化文庫,并提供靈活高效的篩選服務。
噬菌體展示服務簡介
M13單鏈絲狀噬菌體展示系統是目前應用*泛的文庫展示系統,通過將蛋白、抗體或多肽與噬菌體plII蛋白融合表達,使之參與噬菌體組裝,并展示在噬菌體表面,形成噬菌體展示文庫。使用噬菌體展示文庫,針對特定靶分子進行3- 5輪親和篩選,可以富集能特異性結合靶分子的噬菌體,得到相應的DNA序列信息。
艾柏森生物目前開發的噬菌體展示技術服務平臺涵蓋了免疫抗體庫、天然抗體庫等常用的文庫類型,可根據客戶的特殊需求定制個性化文庫,并提供靈活高效的篩選服務。
艾柏森生物平臺系統主要包括pComb3噬菌體展示系統和pCANTAB5e噬菌體展示系統:
★pComb3噬菌體展示技術流程
1>抗體基因庫的獲得:收集目標抗體宿主的免疫細胞,提取細胞總RNA;反轉錄后,使用多對引物分別擴增VH-CH1抗體基因片段和VL-CL1抗體基因片段; .
2>抗體基因庫轉化大腸桿菌:將以上擴增的抗體基因庫連接至pComb3質粒,隨后電轉化大腸桿菌XL12 Blue;同時鑒定基因庫庫容(及抗體基因的插入率) ;
3>噬菌體Fab抗體庫的構建:將輔助噬菌體VCSM13加入到轉入了抗體基因的,生長至對數生長期的大腸桿菌中進行噬菌粒拯救;培養過夜后,離心收集上清即獲得噬菌體Fab抗體庫;
4>抗體庫的滴度測定:取少量上述獲得的噬菌體Fab抗體庫,梯度稀釋后進行噬斑培養實驗,觀察噬斑生長情況以判斷噬菌體F ab抗體庫的滴度;
5>噬菌體抗體庫的富集篩選:使用靶標抗原包被酶聯板,加入噬菌體抗體進行孵育,隨后進行洗板、洗脫;將洗脫下來的噬菌體抗體進行中和后,再次感染細菌,并進行第二輪的淘洗;共進行3輪淘洗,每輪洗脫后都進行滴度測定; 最后-輪篩選時,設BSA包被的對照組以確定是否富集了大量抗BSA的噬菌體抗體。
圖1 pComb3噬菌體展示技術流程
圖2噬菌粒載體pComb3遺傳圖譜
圖3輔助噬菌體VCSM1 3遺傳圖譜
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