1)切記,細胞培養(yǎng)基的儲存條件是2-8℃。如果細胞培養(yǎng)基不小心被凍,您應(yīng)該融化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生,培養(yǎng)基可以正常使用,如果出現(xiàn)沉淀,只能丟棄這些培養(yǎng)基。
2)貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基,可能在放置幾天后顏色變紫。這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時,碳酸氫鈉導(dǎo)致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口,在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15min,來校正溶液的pH值(確定松開瓶口以保證氣體交換)。
3) 當(dāng)在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時,降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結(jié)合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下,抗生素不被滅活,可能對于細胞達到毒性水平。
4)一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
5)總之,大部分添加物和試劑最多可以凍融3次,如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,將會影響它的性能。6)血清的熱滅活在免疫分析時可以滅活補體系統(tǒng)。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。熱滅活是以往*的操作步驟,并沒有確鑿的證據(jù)說明這樣做是有益的。相反,對大部分細胞而言,GIBCO和HyClone都不推薦熱滅活血清。因為加熱可能使血清中的沉淀增加,使您誤以為污染。
7)在進行傳代培養(yǎng)時,我們強烈推薦進行臺盼蘭活性記數(shù)。研究者常常通過一個簡單的稀釋(1∶4或1∶2)進行傳代,不進行活性檢測,您可能接種比你認為的低得多的濃度的細胞,這常??赡軐?dǎo)致生長緩慢或培養(yǎng)物根本不生長。
8)在訂購的細胞到達后,應(yīng)立即復(fù)蘇,如果培養(yǎng)基還沒有準(zhǔn)備好,可將其放入液氮中,盡快復(fù)蘇。千萬不能放置在-20或-80℃的冰箱內(nèi)。
9)細胞復(fù)蘇往往是比較容易出問題的步驟。請在訂購細胞時就向供應(yīng)商索取詳細的復(fù)蘇步驟,并仔細閱讀。有些供應(yīng)商就不推薦在復(fù)蘇時離心,對此類細節(jié),應(yīng)特別留意。
10)如何避免血清中沉淀物的產(chǎn)生?
A) 解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。并隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
B) 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
C) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
D) 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30min的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。
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