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重組人GDF3影響表達(dá)的因素和解決方法
細(xì)胞因子是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì)，具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫等多種功能。細(xì)胞因子是由多種細(xì)胞產(chǎn)生的，具有廣泛調(diào)節(jié)細(xì)胞功能作用的多肽分子， 細(xì)胞因子不僅作用于免疫系統(tǒng)和造血系統(tǒng)，還廣泛作用于神經(jīng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)，對(duì)細(xì)胞間相互作用、細(xì)胞的增殖分化和效應(yīng)功能有重要的調(diào)節(jié)作用。
重組人GDF3重組要求：
1. 真實(shí)性：重組蛋白產(chǎn)品一致經(jīng)過N末端氨基酸序列分析；必要時(shí)應(yīng)用SDS-PAGE, RP-HPLC和質(zhì)譜(MS)檢測(cè)其真實(shí)性。
2. 純度：應(yīng)用兩種方法分析產(chǎn)品純度。
3. 生物活性：進(jìn)行相應(yīng)的體外或體內(nèi)活性檢測(cè)。
4. 蛋白含量：通過紫外光譜分析，電泳檢測(cè)；必要時(shí)應(yīng)用HPLC定量標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。
5. 內(nèi)毒素：kinetic LAL法檢測(cè)內(nèi)毒素。
6. 微生物：重組蛋白在裝瓶之前都經(jīng)過濾除菌處理。
重組人GDF3影響表達(dá)的因素和解決方法：
影響蛋白原核表達(dá)的因素很多，如蛋白的親水性、密碼子的稀有性、蛋白毒性等。如疏水性過強(qiáng)，就難以表達(dá)；稀有密碼子過多或多個(gè)稀有密碼子連在一起也難以表達(dá)。首先要分析你的蛋白序列和二級(jí)結(jié)構(gòu)，看看是否存在這些影響因素。如果必須要表達(dá)全長(zhǎng)蛋白，像這種情況難度就比較大，可以進(jìn)行密碼子的改造，或者更換載體，或者更換宿主菌。看試驗(yàn)的目的，如果不需要表達(dá)全長(zhǎng)蛋白，如表達(dá)部分抗原性強(qiáng)的片段，可以簡(jiǎn)單一點(diǎn)，表達(dá)部分片段即可。
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