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重組人GDF3影響表達(dá)的因素和解決方法

來源:賽爾瑞成(北京)生命科學(xué)技術(shù)有限公司   2021年08月05日 13:34  
  細(xì)胞因子是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì),具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫等多種功能。細(xì)胞因子是由多種細(xì)胞產(chǎn)生的,具有廣泛調(diào)節(jié)細(xì)胞功能作用的多肽分子, 細(xì)胞因子不僅作用于免疫系統(tǒng)和造血系統(tǒng),還廣泛作用于神經(jīng)、內(nèi)分泌系統(tǒng),對(duì)細(xì)胞間相互作用、細(xì)胞的增殖分化和效應(yīng)功能有重要的調(diào)節(jié)作用。
  重組人GDF3重組要求:
  1. 真實(shí)性:重組蛋白產(chǎn)品一致經(jīng)過N末端氨基酸序列分析;必要時(shí)應(yīng)用SDS-PAGE, RP-HPLC和質(zhì)譜(MS)檢測(cè)其真實(shí)性。
  2. 純度:應(yīng)用兩種方法分析產(chǎn)品純度。
  3. 生物活性:進(jìn)行相應(yīng)的體外或體內(nèi)活性檢測(cè)。
  4. 蛋白含量:通過紫外光譜分析,電泳檢測(cè);必要時(shí)應(yīng)用HPLC定量標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。
  5. 內(nèi)毒素:kinetic LAL法檢測(cè)內(nèi)毒素。
  6. 微生物:重組蛋白在裝瓶之前都經(jīng)過濾除菌處理。
  重組人GDF3影響表達(dá)的因素和解決方法:
  影響蛋白原核表達(dá)的因素很多,如蛋白的親水性、密碼子的稀有性、蛋白毒性等。如疏水性過強(qiáng),就難以表達(dá);稀有密碼子過多或多個(gè)稀有密碼子連在一起也難以表達(dá)。首先要分析你的蛋白序列和二級(jí)結(jié)構(gòu),看看是否存在這些影響因素。如果必須要表達(dá)全長(zhǎng)蛋白,像這種情況難度就比較大,可以進(jìn)行密碼子的改造,或者更換載體,或者更換宿主菌。看試驗(yàn)的目的,如果不需要表達(dá)全長(zhǎng)蛋白,如表達(dá)部分抗原性強(qiáng)的片段,可以簡(jiǎn)單一點(diǎn),表達(dá)部分片段即可。

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