大鼠正常食管上皮細胞；RNEEC/HL-012復蘇操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。

冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。

GT115感受態細胞(化學轉化法或熱激法）

GT115感受態細胞(化學轉化法或熱激法）

MC1061F-感受態細胞(化學轉化法或熱激法）

MC1061F-感受態細胞(化學轉化法或熱激法）

S17-1感受態細胞(化學轉化法或熱激法）

S17-1感受態細胞(化學轉化法或熱激法）

JM330感受態細胞(化學轉化法或熱激法）

JM330感受態細胞(化學轉化法或熱激法）

MG1655感受態細胞(化學轉化法或熱激法）

MG1655感受態細胞(化學轉化法或熱激法）

F-DH5α感受態細胞(化學轉化法或熱激法）

F-DH5α感受態細胞(化學轉化法或熱激法）

DH5a 電轉感受態細胞

DH5a 電轉感受態細胞

SURE 電轉感受態細胞

SURE 電轉感受態細胞