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單細胞測序的主要步驟和特點介紹

來源:Bio-Techne   2021年06月22日 20:23  
  單細胞測序的興起,不僅是新概念炒作,而是在相關領域,長時間由于技術的瓶頸很多生物學問題沒有解決,現在突然有一個技術可以高性價比地解決這些問題,導致這個技術被大量應用。
  以單細胞轉錄組測序技術為例開展探討,單細胞轉錄組主要包括以下四個步驟,其中關鍵的一點就是如何進行單細胞的捕獲/分選,這是決定單細胞檢測成本和通量的關鍵步驟。
  主要步驟:

  在細胞分選的方法里,主要包括特異性分選和非特意性分選兩類方法,兩類方法的關系有點類似定量(只針對特定目標基因進行檢測)和轉錄組測序。

        非特異性選擇的方法則通常都是高通量的方法,一般是用特定的技術隨機從樣本中捕獲的大量細胞單體,然后直接平行對大量細胞進行獨立的測序,再從大量單細胞數據中尋找自己感興趣的細胞類型進行后續分析。反轉錄擴增過程中,每個細胞的cDNA會被接上特異的接頭序列,保證后續混合測序后還能重新獨立拆分每個細胞的數據,芯片由于可以平行進行96個細胞的建庫測序,降低了成本。但是這種方式進行單細胞制備時,每個細胞的裂解和核酸擴增反應都不能很*、*,因此每個細胞最終獲得的基因數量很有限,一般在1000-2000個左右。而且無法進行細胞篩選,導致大量無用細胞的數據被記錄,大大增加了背景噪音信號。如果要增加每個細胞能獲得的基因數量,必須選擇另一種通量較低的方式進行。

       特異性選擇方法,就是用特定標志對特定目標細胞進行挑選,然后對目標細胞開展測序。這種方式雖然通量較低,但是由于每個細胞都是在單獨的PCR管中進行裂解和核酸擴增,每一步的反應都可以進行得很*,因此每個細胞最終能獲得的基因數等達到10000個左右。另外,由于特異性選擇獲得的單個細胞都是經過篩選的目的細胞,因此數據質量遠高于非特異性選擇的高通量方式。

  單細胞測序要獲得最終高質量數據,我們需要一個好的單細胞分離工具。Namocell單細胞分離儀可以幫助用戶進行快速、高效、輕柔地單細胞分離捕獲。分離后的單個細胞是經過篩選的用戶感興趣的目的細胞,并且都具備很好的細胞活性,非常適合進行單細胞測序。


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