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重組人GDF3操作步驟不會的看過來

來源:賽爾瑞成(北京)生命科學技術有限公司   2021年06月08日 18:41  
   重組人GDF3原核表達在表達當中來說還是比較簡單,細菌培養條件簡單、生長速度快,需要的儀器和培養基都比較便宜。當然,它也存在一些缺乏高級修飾、細胞內部還原性過高等缺點。原核表達從一開始的設計就非常重要,所謂好的開始是成功的一半。要根據是否要求可溶將載體分成兩大類,可以同時嘗試多種表達系統,也有許多商業化的系統供選擇。
  重組人GDF3操作步驟:
  1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
  2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
  3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
  4.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
  5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
  6.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
  7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
  8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
  9.在450nm波長處測定各孔的OD值。
 

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