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重組人Flt3L表達出來的蛋白為什么比實際要小

來源:賽爾瑞成(北京)生命科學技術有限公司   2021年05月10日 18:14  
   重組人Flt3L是一種膜蛋白,能夠刺激早期造血的細胞因子。在體、離體試驗均證實,可調節非紅系造血干/祖細胞的增殖和分化,與多種細胞因子協同,可促進前B淋巴細胞、樹突狀細胞、自然殺傷細胞、細胞毒T淋巴細胞的增殖、分化和成熟,從而具有重要的抗腫瘤作用。本產品由真核細胞表達的重組蛋白,是將蛋白基因接入穩定表達載體,轉化CHO-K1細胞,經克隆篩選,質量驗證,挑選的穩定表達株,由化學成分確定的培養基發酵制備,工藝穩定,保證了產品質量及批次間的一致性。
  重組人Flt3L表達出來的蛋白比實際要小是因為:
  1、蛋白本身被降解了,可以存在一些不利于該蛋白穩定的蛋白酶
  2、翻譯起始位點的問題:如果一個類似于核糖體結合位點的序列加上適當的間隔序列出現在了ATG密碼子上游,降解就會有可能出現。解決的方法可以采用兩端都帶有融合標簽的載體,全長蛋白就可以通過提高咪唑濃度,在洗脫時將截短蛋白與全長蛋白區分開。或者在蛋白兩端采用不同標簽,進而通過親和純化的方式得到全長蛋白。
  3、影響蛋白穩定性的另外一個因素是與N端Met相鄰的氨基酸,即N端原則,當下列氨基酸出現在N端時:蛋白的半衰期較短,蛋白會存在不穩定降解的問題,當它出現在第二個位置上時,蛋白極度不穩定。
  重組人Flt3L采用夾心法酶聯免疫吸附法,用于體外定量分析人血清、血漿、細胞裂解液或細胞培養上清中Flt3L的含量。預先包被的抗體和檢測相抗體都是Flt3L單克隆抗體。檢測相抗體經生物素標記。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應;在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人Flt3L呈正相關。
 

重組人Flt3L

 

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