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色譜柱的物理化學(xué)性質(zhì)你都知道嗎?

來(lái)源:島津(上海)實(shí)驗(yàn)器材有限公司 SGLC   2021年04月19日 13:46  

色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。

現(xiàn)代高效液相色譜分析中,色譜柱的選擇直接影響了分離效果的好壞,選擇合適的色譜柱可以縮短方法開發(fā)所需的時(shí)間,并且使方法更具穩(wěn)定性。但是現(xiàn)在市場(chǎng)上色譜柱種類繁多,不同類型的色譜柱分離對(duì)象不同,因此,要做合適的選擇,必須對(duì)此有一定的認(rèn)識(shí)和了解。

 

色譜柱參數(shù):

 

一、物理性質(zhì):

1、柱長(zhǎng),內(nèi)徑,如250*4.6mm。一般柱長(zhǎng)在2—250mm,柱越長(zhǎng),分離度越高,但柱壓更高,分離所需時(shí)間更長(zhǎng);但分離度與理論塔板數(shù)的平方根成正比,所以一昧增加柱長(zhǎng)并不是有效的分離手段,一般情況下,150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數(shù)。 

2、粒徑,影響色譜分離度。粒徑越小,分離越快,柱效越高,但柱壓力越高,柱容易被污染,導(dǎo)致柱壽命降低。常見分析柱通常使用5um填料,復(fù)雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒徑,更大內(nèi)徑的制備色譜柱通常使用更大的粒徑。如果固定相選擇是正確,但是分離度不夠,那么選用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍,因此如何選擇填料粒徑需要根據(jù)現(xiàn)實(shí)情況而定。

3、孔徑,60A,120A,300A等。孔徑小,則含孔率高,比表面積大,載碳量高;色譜柱填料孔徑大小需和分子大小相匹配,保證分子自由進(jìn)出填料孔并與孔內(nèi)表面的鍵合相進(jìn)行分離分配,通常要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上,一般小分子使用80—120A,大分子使用300A。

4、顆粒形狀,一般有球形和不規(guī)則形,當(dāng)使用黏度較大的流動(dòng)相時(shí),球形顆粒可以降低柱壓,延長(zhǎng)色譜柱壽命。

5、比表面積,指的是每克填料的表面積,如180m2/g—350m2/g,與粒度和含孔率有關(guān);比表面積大,會(huì)增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng),增加保留和分離度;比表面積小則可以縮短分析時(shí)間和平衡時(shí)間,并不是比表面積大或者小就更好,需要選擇合適的比表面積。

 

二、化學(xué)性質(zhì):

1、硅膠基質(zhì):通用的基質(zhì),強(qiáng)度大,化學(xué)修飾容易,但使用的pH值范圍有限(一般為2—8,特殊修飾的可以達(dá)到1—12)。

2、聚合物基質(zhì):多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂,化學(xué)穩(wěn)定,應(yīng)用pH范圍寬,具有更強(qiáng)的疏水性,對(duì)蛋白質(zhì)等樣品分離效果較好;但強(qiáng)度較小,有機(jī)溶劑可能導(dǎo)致聚合物溶脹而受損,批次重復(fù)性較差,商品化色譜柱不多,一般價(jià)格較貴。

3、載碳量:基質(zhì)表面鍵合相的比例,載碳量高,則保留增加,適合分析非極性化合物。

4、鍵合相:鍵合試劑不同,對(duì)化合物的選擇性不同,一般長(zhǎng)鏈的烷基鍵合相(C18 C8)比短鏈的(C4 C3)穩(wěn)定;非極性的鍵合相比極性的鍵合相(-NH2)穩(wěn)定。

5、封端:用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來(lái),以減少殘留的硅醇基,減輕待測(cè)組分與酸性硅羥基反應(yīng)而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象。尤其對(duì)于極性樣品而言,未封端處理的色譜柱分離效果較差。

 

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