ECHO IgM elisa酶聯免疫試劑盒檢測中樣品的處理:
1.細胞培養物上清:細胞培養物于室溫1000g,離心10分鐘后收集上清,并將標本保存于-20℃,且應避免反復凍融。
2.血清:標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g,4℃離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
3.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑標本采集后30分鐘內于2-8℃,1000g離心15分鐘,或將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
4.尿液:無菌收集取初尿,離心除去沉淀物,即可用于檢測,要長期保存尿樣,可以加入0.05%的NaN3在4-8℃保存,或加入尿樣冰凍保護液放入-20℃冰箱長期保存。
5.組織勻漿:將組織標本先用PBS洗滌,除去多余血液,勻漿化后放在PBS于-20℃放置過夜,再經過二次反復凍融破膜,5000g,4℃離心5分鐘,取上清即可檢測。注:取樣和樣品處理過程中,防止有毒物質對操作人員的危害,要采取相應的保護措施。
elisa酶聯免疫試劑盒(間接法)
(1) 抗原包被:用包被液將PEDV抗原作1∶5稀釋包被反應板,每孔100μl,同時設陰性細胞培養物對照孔,置4℃過夜。
(2) 洗滌:用洗滌液洗滌2次,每次2min,瀝干。
(3) 加入被檢血清:用保溫液將被檢血清作1∶100稀釋,加入反應板相鄰的兩個孔中,每孔100μl。同時作陰、陽性標準血清對照,置37℃孵育1h。
(4) 洗滌3次:方法同上。
(5) 加入酶結合物:用保溫液將酶結合物作1∶4 000稀釋,加入反應孔中,每孔100μl,置37℃孵育1h。
(6) 洗滌3次:方法同上。
(7) 加入底物:每孔100μl,置室溫暗盒內顯色20min。
(8) 加入終止液:每孔50μl,靜置5min。
(9) 測定OD值:用檢測儀,于492nm波長,按儀器使用及制定標準要求調節儀器,測定各反應孔的OD值,記錄結果。
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