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人神經上皮瘤細胞細胞(SK-N-MC)培養說明書

來源:上海研謹生物科技有限公司   2021年04月08日 18:00  

人神經上皮瘤細胞細胞(SK-N-MC)培養說明書

 

細胞介紹

這株細胞與HTB-11都是神經源的。19719月分離得到SK-N-MC后,發現它有中性多巴胺-β-羥化酶活性,也有細胞內兒茶酚胺,用甲醛可以誘導出熒光。

 

細胞特性

1) 來源:腦;眼眶上區神經上皮瘤轉移灶

2) 形態上皮細胞

3) 含量:>1x106 /mL

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規格:T75或者1mL凍存管包裝

 

運輸和保存:使用含有優質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后,1000RPM,常溫條件,離心5min潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養基轉移至10cm培養皿或者T75培養瓶中培養,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

 

細胞用途:僅供科研使用。

                       

細胞培養步驟

一.培養基培養凍存條件準備:

1) 準備MEM培養基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)90%;優質胎牛血清,10%。

2) 培養條件 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液90%*培養基,10%DMSO現用。液氮儲存。

二. 細胞處理

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%可進行傳代培養。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2

2. 2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA培養瓶中,置于37培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化

3. 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1215的比例分到新的8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3)細胞凍存:細胞生長狀態良好時,進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進行凍存

 

注意事項:

1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系

2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性,必須在二級生物安全內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

 

實驗代做服務:

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

HE染色

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化IHC染色

熒光定量PCR

動物模型服務

流式細胞檢測

免疫熒光染色

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

石蠟/冰凍切片

透射電鏡服務

掃描電鏡實驗

蛋白雙向(2-D)

動物實驗

免疫共沉淀

原位雜交(FIsh

蛋白質純化

分子克隆和質粒載體構建服務

組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

 

蛋白雙向2D-WB

 

藥理毒理動物實驗

 

番紅O固綠染色

明膠酶譜MMP

酶活性檢測

動物造模/模型實驗服務

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