關于常見色譜柱的認識誤區(qū)(二)

來源：東曹（上海）生物科技有限公司 2021年03月28日 16:32

　　色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類，液相色譜通常均采用填充柱，色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。

　　誤區(qū)4、至少需要10個柱體積才能重新使LC色譜柱達到平衡

　　平衡時間對于梯度色譜來說是非常重要的，因為它是整個技術的限制因素。這有兩種平衡類型：重復平衡和*平衡。重復平衡也就意味著在無法實現(xiàn)*平衡的情況下達到的平衡。

　　實際上，如果在隨后的運行中，保留時間的重復性是小于0.002min的，然后對于非離子化溶質(zhì)的無緩沖洗脫劑和堿性化合物以常用的甲酸為添加劑的話，重復平衡在兩個柱體積的范圍內(nèi)即可實現(xiàn)。

　　誤區(qū)5、相較之純的多孔粒子，表面多孔顆粒會顯著降低樣品容量

　　HPLC色譜柱填料對樣品的容量是與其表面積成正比的，這與硅醇基通過單體鍵合形成的化學鍵合相的量相關。然而，研究結(jié)果表明：在相同的試驗條件下，表面多孔顆粒與多孔粒子對樣品的容量是基本上相同的。

　　誤區(qū)6、UHPLC填料柱比常見的HPLC填料柱更容易堵塞

　　隨著柱填料多孔材料粒徑的不斷減小，使得柱的主要硬件設計跟著一起發(fā)生變化。對于sub-2μmUHPLC柱的堵塞，是樣品和流動相物質(zhì)倒伏在柱入口的結(jié)果。如果你在進樣前對樣品進行了凈化，如使用固相萃取、過濾或離心等，就可以避開任何污染問題。

　　誤區(qū)7、保護柱是沒必要的

　　使用保護柱有很多好處。首先，保護柱可以防止化學物質(zhì)或顆粒物損壞分析柱。其次，相較之更換一根昂貴的分析柱，更換一根5mm的保護柱只需要很少的花費?，F(xiàn)代的保護柱具有幾乎無死體積、更換快速，以及適用于UHPLC的高壓等優(yōu)點。

　　誤區(qū)8、你不可以將HPLC色譜柱反接以便于沖洗掉其中的顆粒物

　　實際上HPLC色譜柱的填裝壓力比大使用壓力高很多（通常會高2倍）。如果裝柱時使用了恰當?shù)膭驖{劑，并且分配一定的時間使柱床穩(wěn)定，一支填裝良好的色譜柱是*可以雙向使用的。

　　誤區(qū)9、色譜柱填料粒徑越小、壓力越高，分離效果越好

　　現(xiàn)代色譜柱的柱特性研究已經(jīng)引發(fā)出一些新方法來評估一根色譜柱的性能。例如，采用新的表面多孔材料的色譜柱，其柱效與sub-2μmUHPLC柱效一樣好，然而與常規(guī)的LC填料色譜柱比起來，柱壓很低。

　　誤區(qū)10、柱壓不會影響色譜分離效果

　　色譜的很多參數(shù)都是受柱壓影響的，包括部分溶質(zhì)的摩爾體積、停滯體積、柱孔隙度、保留因子、流動相密度、介電常數(shù)、固定相結(jié)構(gòu)、pH值和電離常數(shù)等。

　　當色譜柱在約2000psi（13.789MPa）壓力下運行時，即使保留時間上存在小差異，也并不會引起我們的注意；特別是如果重復性較好及定量不受影響的時候。但是，當柱壓接近2000psi（13.789MPa）時，柱壓的影響可能就相當明顯了。

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