傳統的光學顯微鏡使用的是場光源,標本上每一點的圖像都會受到鄰近點的衍射或散射光的干擾;
激光共聚焦顯微鏡利用激光束經照明針孔形成點光源對標本內焦平面的每一點掃描,標本上的被照射點,在探測針孔處成像,由探測針孔后的光點倍增管(PMT)或冷電耦器件(cCCD)逐點或逐線接收,迅速在計算機監視器屏幕上形成熒光圖像。
照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔和發射針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖像是標本的光學橫斷面,克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點。
激光共聚焦顯微鏡是采用激光作為光源,在傳統光學顯微鏡基礎上采用共軛聚焦原理和裝置,并利用計算機對所觀察的對象進行數字圖象處理的一套觀察、分析和輸出系統。
把光學成像的分辨率提高了30%~40%,使用紫外或可見光激發熒光探針,從而得到細胞或組織內部微細結構的熒光圖像,在亞細胞水平上觀察生理信號及細胞形態的變化,成為形態學,分子生物學,神經科學,藥理學,遺傳學等領域中新一代的研究工具。
下面讓我們一起來了解一下激光共聚焦顯微鏡的優點吧
1、以激光為光源,在相應的熒光探針標記后,對樣本進行逐點掃描,逐層獲得二維光學橫斷面圖像,具有“細胞CT”的功能,并可通過計算機三維重建軟件支持,獲得三維圖像,并可以任意角度旋轉,觀察細胞,組織立體形態和空間關系;
2、可以對活細胞和組織進行無損傷的觀察,動態測量細胞內的Ca離子濃度和pH值等活細胞生理信息;
3、可對細胞膜的流動性,細胞間通訊,細胞融合,細胞骨架彈性測量等,可用作“光刀子”完成細胞內“外科手術”。這一技術可以對活細胞和組織進行原位動態定量的觀察和測量。
與傳統光學顯微鏡相比,激光共聚焦顯微鏡具有更高的分辨率,實現多重熒光的同時可觀察并可形成清晰的三維圖像等優點
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