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關(guān)于PAN胎牛血清使用中遇到的常見(jiàn)問(wèn)題總結(jié)

來(lái)源:上海滬鼎生物科技有限公司   2021年02月19日 11:45  

1、問(wèn):加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎?
 
答:不是必須的,看做什么實(shí)驗(yàn)了。
 
2、問(wèn):PAN胎牛血清滅活是56℃ 30分鐘嗎?
 
答:如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞,血清一般是不需要滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長(zhǎng)因子。 但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補(bǔ)體受體的細(xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞,血清是 需要滅活,一般是56℃,30min。
 
3、問(wèn):我要做滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng),胎牛血清要滅活嗎?
答:進(jìn)口的一般都已滅活,國(guó)產(chǎn)的不一定,還是滅活一下再用較安全。
 
4、問(wèn):我用病毒上清轉(zhuǎn)染細(xì)胞,培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎?因?yàn)檠逯锌赡苡行┭a(bǔ)體和抗體,是不是會(huì)影 響轉(zhuǎn)染?我想未滅活的血清中含些抗體補(bǔ)體可能會(huì)和病毒相結(jié)合,影響 轉(zhuǎn)染,正確嗎?細(xì)胞是單核細(xì)胞白血病細(xì)胞, 病毒是病毒包裝細(xì)胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無(wú)血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時(shí),目的是什么?
 
答:血清一定要滅活,可以先用無(wú)血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時(shí)以后再加血清。避免雜蛋白對(duì)病毒和宿主 結(jié)合過(guò)程的干擾,一般是2-6小時(shí),根據(jù)細(xì)胞的狀態(tài)決定。血清不一定需 要滅活,滅活的目的是將血清中的補(bǔ)體滅活 !這要根據(jù)實(shí)際情況而定,如果沒(méi)有把握那就滅活吧,也不麻煩56度半個(gè)小時(shí)。


5、問(wèn):因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室水浴鍋失控,血清滅活時(shí),溫度到了61.7℃,這血清還能用嗎?
 
答:多長(zhǎng)時(shí)間啊?短時(shí)間應(yīng)該可以吧,我有一次加熱了一個(gè)多小時(shí),還照樣用。
 
6、問(wèn):我滅活胎牛血清時(shí),用的電磁爐,定在了70℃,本來(lái)說(shuō)調(diào)溫度到56℃再放血清的,后來(lái)忘了,就把 血清放進(jìn)去了,所以滅活的溫度肯定超過(guò)56℃了,不知道這樣對(duì)血清 有沒(méi)有影響?
 
答:常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等,其中常用的手法是56℃ 熱處理30分鐘??纯茨沭B(yǎng)的細(xì)胞是什么,一般的話估計(jì)問(wèn)題不大,要是 很珍貴的細(xì)胞還是慎重一點(diǎn)啊。熱滅活目的是 為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì), 在對(duì)補(bǔ)體滅活以外,熱處理同時(shí)也對(duì)血清中可能存在的支原體具有滅活作 用?,F(xiàn)在好像不主張熱 滅活,熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來(lái)負(fù)面影響,對(duì)血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生,此外 ,有研究結(jié)果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對(duì)細(xì)胞的促粘附作用。

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