防止細(xì)胞老化主要還是要做到勤觀察、勤換液、勤傳代、勤保種,特別是傳代,不能等細(xì)胞太密了之后傳,一般細(xì)胞建議長到70%融合度傳代完好;換培養(yǎng)液應(yīng)該根據(jù)自己細(xì)胞消耗培養(yǎng)基的情況來確定是否該換。如果感覺時間不好把握的話就多培養(yǎng)幾瓶細(xì)胞,在不同的時間換液,后再來比較下,看什么時候換液好,得出自己的結(jié)論。
選擇正確的血清與培養(yǎng)基:細(xì)胞對血清特別敏感,直接影響細(xì)胞的生長。一定要選擇適合的血清不然就會因營養(yǎng)物質(zhì)不協(xié)調(diào)而導(dǎo)致細(xì)胞老化;在間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)時必然要進行消化,但是消化對細(xì)胞的表面蛋白質(zhì)有很強的破壞作用,因此不能長時間進行消化并且在選擇消化酶時也要選擇較為合適的pH和濃度,不然就會使細(xì)胞老化或者分化。雖然,老化細(xì)胞不會立即死亡,但其基因表達會發(fā)生變化,如果細(xì)胞老化現(xiàn)象嚴(yán)重,建議從種子庫或工作庫重新復(fù)蘇細(xì)胞。
在進行細(xì)胞培養(yǎng)時,我們經(jīng)常會聽到一些專業(yè)名詞,原代培養(yǎng)是什么?什么是世代數(shù)?細(xì)胞系是什么?。根據(jù)老師們的反饋,我們總結(jié)了以下容易混淆的概念供大家參考~
1、原代培養(yǎng)(Primary culture)
開始于直接取自生物體的細(xì)胞、組織或器官的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。通常代表異質(zhì)細(xì)胞群,很難標(biāo)準(zhǔn)化和繁殖。它們的壽命一般有限,而且已知它們會隨著時間而改變其差異特征。
2、傳代(Passage(Subculture))
細(xì)胞從一個皿里轉(zhuǎn)移或傳代到另一皿里的過程稱為細(xì)胞傳代。這是一個操作行為,無法準(zhǔn)確定義細(xì)胞分裂次數(shù)。
3、傳代次數(shù)(Passage number)
一種細(xì)胞被傳代培養(yǎng)的次數(shù)稱為傳代次數(shù)。
4、世代數(shù)(Generation number)
一種細(xì)胞所經(jīng)歷的細(xì)胞數(shù)量倍增次數(shù)稱為世代數(shù)。
5、群體倍增時間(Population doubling time)
在對數(shù)生長期中期細(xì)胞數(shù)量翻倍所需要的時間間隔稱為群體倍增時間。
6、群體倍增次數(shù)(Population doubling)
在培養(yǎng)過程中細(xì)胞所經(jīng)歷的細(xì)胞數(shù)量倍增次數(shù)稱為群體倍增次數(shù)。
7、細(xì)胞系(Cell line)
原代細(xì)胞經(jīng)過第①次傳代后增殖的細(xì)胞稱為細(xì)胞系或亞克隆。隨著細(xì)胞的傳代,生長能力強的細(xì)胞會占據(jù)優(yōu)勢,終導(dǎo)致細(xì)胞群體在基因型和表現(xiàn)型上達到一定程度的均一性。
8、細(xì)胞株(Cell strain)
細(xì)胞系通過選擇或克隆獲得的具有特征的細(xì)胞系稱為細(xì)胞株。與親代細(xì)胞系起始時相比,細(xì)胞株往往會獲得其他一些遺傳學(xué)改變。
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