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CCK-8試劑做實(shí)驗(yàn)時(shí)有哪些需要注意的事項(xiàng)
今天我給大家說說用CCK-8試劑做實(shí)驗(yàn)時(shí)的注意事項(xiàng)：
1.第一次做實(shí)驗(yàn)時(shí)，建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。
2.接種時(shí)注意細(xì)胞懸液一定要混勻，以避免細(xì)胞沉淀下來，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不一致。
3.培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā)，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基。
4.建議采用多通道移液器，減少平行孔間的誤差，加CCK-8時(shí)，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基液面下加，容易產(chǎn)生氣泡，干擾OD值。
5.若細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色或pH發(fā)生變化，建議更換培養(yǎng)基后再加CCK-8，含有酚紅的培養(yǎng)基不影響測(cè)定。
6.CCK-8對(duì)細(xì)胞的毒性非常低，其他的實(shí)驗(yàn)，例如中性紅法或結(jié)晶紫法，也可在CCK-8法檢測(cè)完后繼續(xù)進(jìn)行。
7.可以使用大于600nm的波長(zhǎng)，例如650nm，作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定，CCK-8在參比波長(zhǎng)處沒有吸光值，設(shè)定參比波長(zhǎng)的目的是為了去除由于樣品渾濁所帶來的吸收。
8.如果實(shí)驗(yàn)中待測(cè)物質(zhì)有氧化還原劑，在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入藥物，然后加入CCK-8試劑在一定時(shí)間內(nèi)檢測(cè)，和不加藥物的培養(yǎng)基進(jìn)行比較(只加CCK-8試劑)，如果OD值明顯偏高，則說明有反應(yīng)。
9.加CCK-8試劑時(shí)速度要快，減少試劑在移液器上的殘留，加入CCK-8試劑后輕輕震培養(yǎng)板，為了避免加樣時(shí)由于CCK-8殘留在槍頭上所帶來的誤差，可以在加樣前用培養(yǎng)稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣。
10.CCK-8反復(fù)凍融會(huì)增加背景值，干擾實(shí)驗(yàn)測(cè)定。
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