離子交換層析是目前在生物大分子純化中應用廣泛的方法之一。離子交換層析依附于離子交換填料使用。離子交換填料也稱為離子交換介質,由基質和配基組成。目前主流的離子交換填料有DEAE,CM,Q,SP,ANX,MMA,MMC.離子交換填料已有70多年的歷史,目前離子交換填料也呈現出多樣性,主要是其基質的種類越來越多,不同基質的離子交換填料其性能差別很大,下面就分別介紹下主要的離子交換介質及其特點。
一、交聯纖維素基質離子交換填料
20世紀50年代中期,Sober和Peterson合成CM纖維素和DEAE纖維素,是用于生物大分子分離早的離子交換填料之一。比較典型的代表是DE52和CM52。市場主要以無定行的居多且大多是干粉狀態,使用前需要溶脹。目前使用的越來越少,趨于淘汰。
特點:耐壓性小,流速小,趨于淘汰。
二、交聯葡聚糖基質離子交換填料
葡聚糖基質離子交換填料是以葡聚糖凝膠(Sephadex)G25和G50為基質,連接不同的離子交換配基構成。比較典型的是DEAESephadexA-50和CMSephadexC-50,市售產品也多以干粉狀態,使用前需要溶脹,且溶脹系數較大,C-50溶脹倍數一般大于25倍。由于其孔徑較小,耐壓性較差,目前也趨于淘汰狀態。在起源比較早的生物制品廠使用的比較多。
特點:耐壓性差,排阻極限小,使用范圍窄,趨于淘汰。
三、高分子聚合物離子交換填料
高分子聚合物離子交換填料的品種比較多,有專門用來分離小分子的樹脂,也有用來分離純化蛋白的聚合物離子交換填料。分離蛋白的聚合物離子交換填料代表的有TSKgelSP-5PW和TSKgelDEAE-5PW,市場上聚合填料種類比較多,有單分散的,也有不是單分散球形的,因其親水性比多糖要差,目前大多在其表面進行親水性處理。聚合物離子交換填料有很高的耐壓性和均一的球徑,相比多糖基質的離子交換填料,其生物相容性,回收率方面略差一些,特別是在疫苗等超大分子純化時差異更大。聚合物基質離子交換填料在多肽及其它小分子物質純化中廣泛使用。
特點:耐壓性高,流速大,生物相容性略差。
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