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紅色熒光標記人源高密度脂蛋白(Human DiI-HDL)操作說明

來源:青島捷世康生物科技有限公司   2020年12月28日 15:09  

產品描述

脂蛋白在人體中主要起到運輸脂質(如膽固醇、脂質、甘油三酯)的作用,按照分子量大小,主要分為以下幾種(從高到低):乳糜(CM)、極低密度脂蛋白 (VLDL)、中間密度脂蛋白 (IDL)、低密度脂蛋白 (LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等。其中HDL是密度高的脂蛋白,不像其他大分子脂蛋白,主要將脂質運輸到細胞,HDL是將脂質運出細胞,因此,高密度脂蛋白具有清除血管內多余血脂、清除血垢、清潔血管、維持細胞內膽固醇量的相對衡定的作用,從而限制動脈粥樣硬化的發生發展,起到抗動脈粥樣硬化作用。

本品Human DiI-High Density Lipoprotein為熒光探針DiI(1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate)標記的高密度脂蛋白,可以用來觀察培養細胞的HDL結合位點,或篩選HDL受體表達缺陷型細胞突變株。也可以通過流式細胞術評估細胞受體水平,或檢測組織內的受體水平。

提供的Human DiI-HDL為無菌包裝,可以直接稀釋使用。除提供DiI-HDL,我們還提供不帶標記的HDL,I125標記的HDL。

制備方法

純化的人健康血漿來源的HDL直接標記上DiI熒光探針,然后通過超速離心以及透析的方法純化回收標記產物,并濾膜過濾除菌。純化的DiI-HDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS,pH 7.4中。

運輸與保存方法

冰袋運輸;

4ºC無菌避光,收到貨后可穩定保存6周。千萬不可凍存使用時一定要無菌操作!

注意事項

1) 本品的稀釋工作液極不穩定,建議即配即用;

2) 長期貯存可能會有沉淀析出,屬于正常現象,低速離心2 min去除沉淀即可使用;

3) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

紅色熒光標記人源高密度脂蛋白(Human DiI-HDL)操作步驟

1) 無菌條件下,將DiI-HDL用細胞培養基稀釋至10-30 µg/ml。

2) 加入活細胞內,37℃培養4-5小時。

3) 孵育結束,吸去含有Human DiI-HDL的培養基,并用無探針的培養基洗幾次。

4) 根據實驗需求用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。

a) 熒光顯微鏡觀察

采用標準的羅丹明激發:發射濾光片(或建議使用波長為:Ex/Em=549nm/565nm);若需要請使用含3%甲醛的PBS進行固定,切勿使用甲醇或丙酮固定,因DiI易溶于有機溶劑。【注】:需設陽性細胞以做對照。

b)  細胞分選(流式細胞術)

胰蛋白酶處理細胞或者加入EDTA制成單細胞懸液,選用合適的已標記純化細胞用作陰性和陽性對照,從而進行流式分選設門(gate)。(建議使用波長為Ex: 514/549nm; Em: 565nm)。

 

 

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