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平板細胞克隆形成試驗

來源:北京百奧思科生物醫學技術有限公司   2020年12月25日 14:22  

平板細胞克隆形成試驗

克隆形成試驗可反映細胞群體依賴性和增殖能力。一般細胞在體外增殖六代以上,其后代形成的細胞群體稱為細胞集落或克隆。每個克隆由單一細胞而來,含有50個以上細胞,大小在0.3-1mm之間。通過克隆形成可檢測各種理化因素對細胞克隆形成能力的影響。平板克隆形成試驗可檢測貼壁細胞細胞的克隆形成能力,軟瓊脂集落形成試驗可檢測非錨著依賴生長的細胞,如骨髓造血干細胞、腫瘤細胞株、轉化細胞系等。

基本步驟:

1、取對數生長期的各組細胞,分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞,并把細胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養液中備用。

2、將細胞懸液作梯度倍數稀釋,每組細胞分別以每皿50、100、200個細胞的梯度密度分別接種含10mL 37℃預溫培養液的皿中,并輕輕轉動,使細胞分散均勻。置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細胞培養箱中培養2~3周。

3、經常觀察,當培養皿中出現肉眼可見的克隆時,終止培養。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定細胞5mL固定15分鐘。然后去固定液,加適量GIMSA應用染色液染10~30分鐘,然后用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥。

4、將平皿倒置并疊加一張帶網格的透明膠片,用肉眼直接計數克隆,或在顯微鏡(低倍鏡)計數大于10個細胞的克隆數。后計算克隆形成率。

注意事項1. 試驗成功的關鍵是細胞懸液的制備和接種密度。細胞一定要分散得好,不能有細胞團,接種密度不能過大。

 

2. 細胞在進行克隆形成實驗時要求有95%以上的分散度,否則結果的準確度會受到很大影響。

其他1. 克隆形成率公式:克隆形成率 =(克隆數/接種細胞數)×100% ,細胞克隆形成率即細胞接種存活率,表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數量。

 

2. 一般初代培養細胞克隆形成率弱,傳代細胞系強;二倍體細胞克隆形成率弱,轉化細胞系強;正常細胞克隆形成率弱,腫瘤細胞強。

服務流程:

1) 項目方案的確定,包括目的細胞、細胞處理方式及處理時間等。

2) 細胞培養

3) 克隆形成實驗

4) 克隆形成實驗圖片及實驗報告

服務周期:3~5周

 MDL服務項目

動物實驗相關、WB、IP和Co-IP服務、蛋白質純化、蛋白質雙向電泳、明膠酶譜、細胞增殖、細胞培養、細胞周期凋亡、平板克隆、免疫熒光、免疫組化、常規及特殊染色、包埋切片爬片、定量pcr、elisa檢測服務、普通生化試劑盒檢測、全自動生化檢測項目等。

                         

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