真核細胞培養(yǎng)時支原體污染表現(xiàn)以及解決方式
支原體是一種特殊的微生物,在哺乳動物(包括人類)、爬行動物、昆蟲和植物中廣泛分布。它是小、較為簡單的可自我復(fù)制的原核生物,大小僅為0.2-0.8um。支原體的基因組僅為0.58-2.20Mb,其自身生物合成能力有限,因此大部分營養(yǎng)物質(zhì)都要依賴于宿主。
在真核細胞培養(yǎng)過程中,支原體感染發(fā)生率達到63%,因而細胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個世界性的難題。細胞培養(yǎng)中常遇見的有細菌污染、真菌污染、支原體污染、病毒污染等。說起支原體污染,估計細胞培養(yǎng)的同學(xué)就開始犯愁了,細胞培養(yǎng)的老手都知道,支原體污染非常不易察覺。有的實驗室被支原體污染后,如果不進行有效*的支原體清除,該實驗的細胞培養(yǎng)很難進行下去,細胞傳代3代以后狀態(tài)就急劇下滑,無法進行正常實驗,有的實驗室甚至只能指望換細胞間。
真核細胞培養(yǎng)時支原體污染表現(xiàn)
細胞形態(tài)改變,一般是有梭形變成圓形,不再貼壁生長,漂浮
光鏡下,可以看到細胞膜上吸附很多圓點,40*16倍下約有0.1mm,分布多集中于細胞核周圍和細胞邊緣,中間部位較少
消化時可以看到圓點從細胞膜上游離出來,很多,還會動
細胞培養(yǎng)液變堿,有大量小黑點游離
解決方法
①添加抗支原體劑量的pbs或者其他平衡鹽液進行潤洗,然后消化
②常規(guī)離心,用添加抗支原體(沙星類較為有效)的*培養(yǎng)液重懸,植入新的培養(yǎng)瓶
③培養(yǎng)并且密切觀察(抗支原體推薦使用的濃度及時間如下)
恩諾沙星25μ/ml,治療時間一周;
環(huán)丙沙星10μ/ml,治療時間兩周;
司氟沙星10μ/ml,治療時間一周;
治療時間滿后撤藥換用普通雙抗培養(yǎng)基或者無抗培養(yǎng)基,另外特別說明因為以上藥物均抗G+-,所以添加的時候不需要再添加常規(guī)雙抗。
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