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真核細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)支原體污染表現(xiàn)以及解決方式

來(lái)源:賽爾瑞成(北京)生命科學(xué)技術(shù)有限公司   2020年12月08日 14:44  
   支原體是一種特殊的微生物,在哺乳動(dòng)物(包括人類(lèi))、爬行動(dòng)物、昆蟲(chóng)和植物中廣泛分布。它是小、較為簡(jiǎn)單的可自我復(fù)制的原核生物,大小僅為0.2-0.8um。支原體的基因組僅為0.58-2.20Mb,其自身生物合成能力有限,因此大部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)都要依賴于宿主。
  在真核細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%,因而細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中被支原體污染是一個(gè)世界性的難題。細(xì)胞培養(yǎng)中常遇見(jiàn)的有細(xì)菌污染、真菌污染、支原體污染、病毒污染等。說(shuō)起支原體污染,估計(jì)細(xì)胞培養(yǎng)的同學(xué)就開(kāi)始犯愁了,細(xì)胞培養(yǎng)的老手都知道,支原體污染非常不易察覺(jué)。有的實(shí)驗(yàn)室被支原體污染后,如果不進(jìn)行有效*的支原體清除,該實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)很難進(jìn)行下去,細(xì)胞傳代3代以后狀態(tài)就急劇下滑,無(wú)法進(jìn)行正常實(shí)驗(yàn),有的實(shí)驗(yàn)室甚至只能指望換細(xì)胞間。
  真核細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)支原體污染表現(xiàn)
  細(xì)胞形態(tài)改變,一般是有梭形變成圓形,不再貼壁生長(zhǎng),漂浮
  光鏡下,可以看到細(xì)胞膜上吸附很多圓點(diǎn),40*16倍下約有0.1mm,分布多集中于細(xì)胞核周?chē)图?xì)胞邊緣,中間部位較少
  消化時(shí)可以看到圓點(diǎn)從細(xì)胞膜上游離出來(lái),很多,還會(huì)動(dòng)
  細(xì)胞培養(yǎng)液變堿,有大量小黑點(diǎn)游離
  解決方法
  ①添加抗支原體劑量的pbs或者其他平衡鹽液進(jìn)行潤(rùn)洗,然后消化
  ②常規(guī)離心,用添加抗支原體(沙星類(lèi)較為有效)的*培養(yǎng)液重懸,植入新的培養(yǎng)瓶
  ③培養(yǎng)并且密切觀察(抗支原體推薦使用的濃度及時(shí)間如下)
    恩諾沙星25μ/ml,治療時(shí)間一周;
    環(huán)丙沙星10μ/ml,治療時(shí)間兩周;
    司氟沙星10μ/ml,治療時(shí)間一周;
  治療時(shí)間滿后撤藥換用普通雙抗培養(yǎng)基或者無(wú)抗培養(yǎng)基,另外特別說(shuō)明因?yàn)橐陨纤幬锞笹+-,所以添加的時(shí)候不需要再添加常規(guī)雙抗。
 

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