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M15化學感受態細胞操作方法看似簡單,細節很重要

來源:賽爾瑞成(北京)生命科學技術有限公司   2020年11月24日 10:35  
   M15化學感受態細胞是采用大腸桿菌M15菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞,可用于DNA的化學轉化。它能表達lac阻遏蛋白,抑制T5強啟動子的表達。同時,pREP4還
  賦予宿主菌株卡那霉素抗性。pREP4是從pACYC改造而來的,含有p15A復制子。它能夠與所有帶ColE1復制起點的質粒共存。
  主要特點
  使用pUC19質粒檢測,轉化效率可達108,-80℃保存幾個月轉化效率不發生改變。
  recA1和endA1突變阻止對克隆DNA的修飾或對宿主菌染色DNA的重組,提高純化
  質粒的產量和質量。
  M15化學感受態細胞操作方法
  1、取100μl冰上融化的M15感受態細胞,加入目的DNA并用指尖輕輕敲打管底混勻(避免用槍吸打),冰上靜置25分鐘。
  2、42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
  3、向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基(2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復蘇60分鐘。
  4、5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
  5、將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。
  M15感受態細胞感受態細胞使用注意事項
  1、感受態細胞一般在冰上融化。
  2、混入目的DNA時應輕柔操作。

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