像弗萊明發現青霉素一樣，鱟和內毒素一次碰撞源于科學家Frederik Bang的一只被弧菌感染的美洲鱟。Frederik Bang當時正孜孜不倦地研究著鱟的血液循環，這只不幸感染的美洲鱟死時血液幾近半凝固狀態，這一奇特現象點燃了Bang的求知內心。

幾經驗證，Bang和助手Jack Levin終發現鱟的血液細胞或者變形細胞內含有一種凝固劑，當存在革蘭氏陰性細菌時就能形成凝膠。兩人隨即意識到這種凝膠反應可以作為檢驗熱源物質的"fire alarm"——報警系統。

1977年，美國食品和藥物管理局（FDA）開始允許制藥公司用鱟試劑（LAL）替換低效而繁瑣的兔子毒素測試試驗。

兔子熱源檢測，費時而昂貴；鱟試劑凝膠法，更經濟快速 （圖片來源于百度百科）

同時，基于鱟試劑人們開發出各種不同的方法，每種方法都有其*的特點。例如，凝膠法鱟試驗(PYROGENT™) 提供了一種簡單的陽性/陰性結果，大多數藥典專論將其作為*仲裁試驗。

如下圖所示，樣品經多次稀釋后加入鱟試劑，在水浴鍋中孵育1h，翻轉180°后，看凝膠是否滑落來判斷是否有內毒素。該方法不需要復雜的設備，水浴鍋即可，但水浴鍋本身是潛在的污染源，而且需要定期換水，使用上并不方便。另外，樣品量比較多時會帶來較大的人力負擔。

鱟試劑凝膠法檢測原理圖示 

再者，就是定量法。定量法可以借助于光吸收酶標儀設備，讀取樣品與鱟試劑作用后吸光值的變化，通過標準曲線，計算出樣品內毒素的含量，以量來評估是否可以放行。相比凝膠法會更；其次，樣品量比較大時，在多孔板上設置好對照組和樣品組，讓設備自行運行后分析出結果即可。從來看，比較節省人力成本，減少人力負擔。

定量法又可細分為動態濁度法(PYROGENT™-5000)和動態顯色法(Kinetic-QCL™)。

動態濁度法分析檢測

這些方法具有更小的樣品干擾，當面臨不同的生物制品，比如疫苗制品，疫苗，狂犬疫苗，基因和細胞治療制劑，mAb等時，檢測性和靈敏性更高，檢測限可以低至0.005EU/mL。目前，中國藥典（NMPA）、FDA、美國藥典(USP)、歐洲藥典(EP)、日本藥典(JP)接受所有上述鱟試驗方法。

不同區域的鱟存在顯著差異性，比如東方鱟和美洲鱟個頭差異就很大。批次間的穩定性也會因鱟的個體差異性而不同。

目前市場上有多種國產和進口鱟試劑品牌，國產鱟試劑在價格上有競爭優勢，進口鱟試劑在市場上更受認可。選擇什么樣的鱟試劑和后期臨床前申報是息息相關的。從市場反饋來看，若需在不同國家獲取申報資格，多會選擇在上更受認可的品牌，比如 Lonza 的內毒素檢測試劑盒。

鱟的個體差異性

鱟的歷史可以追溯至古生代的泥盆紀，那時，恐龍尚未出現，原始魚類剛剛問世。然而，自從鱟被用來開發檢測內毒素之后，世界各地均出現*捕撈過度開采的現象。就我國而言，因索取無度，才20余年我國沿海的鱟已從遍布海灘到幾乎絕跡。

鱟采血現場

幸運的是，能夠取代鱟試劑的檢測方法已經問世。Lonza科學家開發了PyroGene™重組表達的C因子檢測方法。C因子是內毒素激活的鱟凝固級聯反應中的一個組成部分，只用于內毒素檢測，是進行內毒素釋放測試的可靠替代方案。

LAL和重組C因子檢測的原理示意圖

重組C因子是一種化學合成的試劑，性狀更穩定，均一性相對也更好。試劑價格目前和鱟試劑相當，后期如在國內外廣泛應用起來，價格會比鱟試劑更具競爭優勢。

重組C因子檢測試劑盒

目前，FDA現已批準重組C因子作為鱟試劑的替代方案，用于生物制品的放行和過程檢測。2020版中國藥典通則9301附錄里面也有關于重組C因子的檢測說明，但是如需放行檢測，還需要做相關驗證試驗。

內毒素檢測只是生物制劑質量控制的冰山一角，然而這一角冰山卻足以毀滅一個物種。正如更多更好的藥物可以造福更多的人，對環境更友善的檢測方法也能造福更多的“小鱟小蝦”。