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小鼠ELISA試劑盒組成結構的方法

來源:上海撫生實業有限公司   2020年11月04日 09:59  

小鼠ELISA試劑盒原理:

    采用競爭法測定金黃地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL水平。用金黃地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL抗原包被微孔板,制成固相載體,實驗時依次在微孔板中加入標本及標準品,并加入HRP標記的OXLDL抗體,標本及標準品中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。反復洗滌后加底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化為藍色,再用硫酸終止反應,轉變成黃色。標本中抗體量越多,結合在固相上的酶標抗體愈少,顏色越淺。顏色的深淺和樣品中的OXLDL含量呈負相關。采用酶標儀在450nm波長測定吸光度(OD值),根據標準曲線,計算測試樣品中OXLDL濃度。

小鼠ELISA試劑盒安全性:

1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

4. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

5. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

6. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同小鼠ELISA試劑盒批號的試劑不要混用。保質前使用。

7. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

8. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

10. 底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

11. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

12. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

小鼠ELISA試劑盒組成結構:

一、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱量和肉毒素的試管。收集血液后,1000*g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心的分離。

二、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

三、細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

四、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。

五、 保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 

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