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哺乳動(dòng)物瞬時(shí)表達(dá)之瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
哺乳動(dòng)物瞬時(shí)表達(dá)是生物哺乳動(dòng)物系統(tǒng)表達(dá)蛋白的方式之一。它能夠在短期內(nèi)得到一定量的重組蛋白/重組抗體。哺乳動(dòng)物瞬時(shí)表達(dá)廣泛地應(yīng)用于基因產(chǎn)物的快速表達(dá)及蛋白質(zhì)的小規(guī)模制備等方面。
將DNA導(dǎo)入真核細(xì)胞的方式有兩種：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是用于建立克隆的細(xì)胞系，這種細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染的目的基因整合到染色體DNA中并指導(dǎo)適量目的蛋白的合成。在此我們主要介紹瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。
在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染中，重組DNA導(dǎo)入感染性強(qiáng)的細(xì)胞系以獲得目的基因暫時(shí)高水平的表達(dá)。轉(zhuǎn)染的DNA不必整合進(jìn)宿主染色體，當(dāng)有大量樣品需要在短時(shí)間內(nèi)分析時(shí)，尤其是在轉(zhuǎn)染后1到4天內(nèi)收獲細(xì)胞，所得溶解產(chǎn)物用于檢測(cè)目的基因的表達(dá)時(shí)，可以采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方式。
將基因?qū)胝婧思?xì)胞的方法有許多種。這些技術(shù)可以歸納成3類(lèi)：生化方法轉(zhuǎn)染、物理方法轉(zhuǎn)染，以及病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染。到目前為止，將克隆DNA導(dǎo)人真核培養(yǎng)細(xì)胞中，主要采用生化方法。
細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)能夠快速靈活的制備重組蛋白，細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后合適時(shí)機(jī)即能可收獲并進(jìn)行分析。南京德泰生物主要以CHO(中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞)和HEK293(人胚腎細(xì)胞)為表達(dá)宿主進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，能夠獲得大量的培養(yǎng)上清液，可生產(chǎn)毫克至克級(jí)的重組蛋白/重組抗體。目前，瞬時(shí)表達(dá)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于抗體生產(chǎn)，疾病診斷，疫苗開(kāi)發(fā)等多個(gè)領(lǐng)域。
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