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牛結核病(TB)酶聯免疫分析(ELISA) 試劑盒使用說明書

來源:青島捷世康生物科技有限公司   2020年09月25日 11:18  

本試僅供研究使用目的本試劑盒于檢測牛清,血漿相關液體樣本中結核病(TB)水平。

實驗原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法ELISA測定標本中結核病(TB。用純化的牛結核病(TB)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中結核病(TB)相結合,經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的結核病(TB)抗體結合,形成抗體-抗原-標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉化成藍色, 并在酸的作用下轉化成終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD ,與 CUTOFF 值相比較,從而判定標本中牛結核病(TB)的存在與否。

樣本處理及要求

  1. 血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20 分鐘左右2000-3000 /。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
  2. 血漿:應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心20 分鐘左右2000-3000 /。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
  3. 尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右2000-3000 /。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
  4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右2000-3000 / 。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用 PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 /ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右(2000-3000 /。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
  5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBSPH7.4,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 /。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
  6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
  7. 不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。?

結果判定:

試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20

臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定:樣品 OD < 臨界值(CUT OFF)者為結核病(TB)陰性

陽性判定:樣品 OD 臨界值(CUT OFF)者為結核病(TB)陽性

注意事項

1. 操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

2. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

3. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5. 底物請避光保存。

6. 試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為 630nm

7. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時必須注意安全。

保存條件及有效期

1. 試劑盒保存:;2-8℃。

2. 有效期:6 個月

 

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