活性氧(Reactive oxygen species,ROS)包括超氧自由基、過(guò)氧化氫、及其下游產(chǎn)物過(guò)氧化物和羥化物等，參與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過(guò)程。
   組織活性氧檢測(cè)試劑盒是一種利用新型熒光探針O13進(jìn)行組織活性氧檢測(cè)的試劑盒。本試劑盒中的O13 ROS探針為紅色熒光的活性氧探針，具有510/610nm的大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。

使用方法：

使用注意事項(xiàng)：
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
● O13染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
● 使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)短離心使DMSO溶液集中于管底。
● 盡量縮短探針標(biāo)記后到測(cè)定所用的時(shí)間，以減少各種可能的誤差。
● 選做，陽(yáng)性對(duì)照誘導(dǎo)劑可以按照1:1000的比例使用。例如標(biāo)記好探針的細(xì)胞共1毫升，可以加入1μl的陽(yáng)性對(duì)照誘導(dǎo)劑刺激。通常刺激后20-30分鐘內(nèi)可以觀察到非常顯著的活性氧水平升高。對(duì)于不同的細(xì)胞，活性氧陽(yáng)性對(duì)照的效果可能有較大的差別。如果在刺激后30分鐘內(nèi)觀察不到活性氧的升高，可以適當(dāng)提高活性氧陽(yáng)性對(duì)照誘導(dǎo)劑的濃度。如果活性氧升高得過(guò)快，可以適當(dāng)降低活性氧陽(yáng)性對(duì)照誘導(dǎo)劑的濃度。
樣本處理：
1．剛?cè)〉玫男迈r組織樣本用PBS洗凈。
2．準(zhǔn)確稱取50mg組織，加入1ml勻漿緩沖液A，用玻璃勻漿器充分勻漿。
3．在1000g，4℃離心10分鐘，棄沉淀，取上清。
樣本檢測(cè)：
1．在96孔板中加入190μl勻漿上清液、10μlO13探針，用移液器吹打，使之充分混勻。
【注】：
● 選做：如有必要，可以做一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照，勻漿上清加入探針后再加入10μl陽(yáng)性對(duì)照。
2．在37℃避光孵育30分鐘。
3．置于熒光酶標(biāo)儀中，后于激發(fā)波長(zhǎng)為488-535nm、發(fā)射波長(zhǎng)610nm檢測(cè)熒光強(qiáng)度。
蛋白定量：
1．另取50μl上清勻漿液，用PBS大約稀釋30倍。
2．取100μl進(jìn)行蛋白定量。
結(jié)果處理：
以熒光強(qiáng)度/毫克蛋白表示組織活性氧強(qiáng)度。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
● 使用方便：可用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)；
● 背景低，靈敏度高；
●線性范圍寬，使用方便。
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
儀器：
● 激光共聚焦顯微鏡或熒光分光光度計(jì)或熒光酶標(biāo)儀激發(fā)波長(zhǎng)488-535nm，發(fā)射波長(zhǎng)610nm。
● 離心機(jī)● 移液器● 冰箱● 冰盒
試劑：
● PBS緩沖液(pH7.4，實(shí)驗(yàn)室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液
●或者HBSS(With：Calcium Magnesium Glucose；Without：Phenol Red。)
●蛋白定量試劑
耗材：
● 離心管● 吸頭