多肽序列
1、序列中包含過多的疏水性氨基酸
一般來講序列中有50%的疏水性氨基酸可大概判斷為較難溶序列(較短的序列除外),更多的疏水性氨基酸不利于合成的粗品純度提高,對于純化的溶解制備都是較大的困難,一般需在純度上溝通好。
2、重復序列
重復序列會造成合成困難,容易形成性質相近的殘肽,從而在純化時較難分離。
3、未知修飾
對于特殊修飾、客戶提供特殊小分子等,即便是合成方法的理論可行,不代表實驗一定成功,確定時需多做考慮,將可能問題體現講清楚,避免不必要的糾紛。
4、長肽
所有的合成反應,效率都不能達到的100%,序列越長,產生的副反應和雜質也越多,正確率、收率都會大大降低,目前我們公司在長肽的合成積累了大量的經驗,理論上盡量不要超過60aa長度,超過80aa長度的,考慮到合成難度、成本等,一般還是采用生物合成。
5、磷酸化修飾
根據合成經驗,3或4個的磷酸化修飾位點合成難度大大增加,更多的磷酸化成功率較低,一般只能做小量合成,合成周期、價格也會大幅提升,另外磷酸化修飾的位點不宜相近或相連,靠近序列的N端對降低合成難度有利。
6、多對二硫鍵成環
二硫鍵的環化會降低序列的溶解性,對于客戶要求多對(3-4對)二硫鍵成環的序列多為天然序列,非天然序列會存在配對錯誤的可能,此為環化過程的難點,另外多對二硫鍵收率都較低,合成時間跟價格也會大幅提升。
7、首尾酰胺環
序列中氨基酸組合對首尾酰胺環的成功率影響較大,含Asp和Glu的序列可選擇固相環化,成功率較高,對于液相首尾酰胺環,序列中含D型氨基酸有利于成環。
8、二肽或三肽的合成
短肽的合成往往收率較低,合成的困難在于裂解后,粗肽無法經析出,純化的困難在于含95%TFA的裂解液不能直接應用于制備,另外短肽極性較大,較難吸附制備柱,造成合成和純化的困難。
國肽生物提供150個氨基酸以內的長肽合成服務。
多肽合成過程中,肽鏈過長時,經常會出現缺殘基,氨基酸縮合困難等情況,基于這些現象,我們開發了三種有效提高反應成功率的方案:
1. 微波合成法:對于合成過程中出現的一些難以縮合的氨基酸,我們采用微波法進行合成,該方法*,并且大大縮短了反應時間。
2. 片段合成法:當某些多肽用常規合成方法合成困難,我們也會采用將多肽中某一段的某幾個氨基酸縮合之后作為一個整體縮合到肽鏈上去,這種方法也能夠解決許多合成中存在的問題。
3.酰肼合成法:酰肼法合成多肽的方法是將固相合成的 N末端Cys 多肽和 C末端多肽酰肼之間的化學選擇性反應形成酰胺鍵而實現多肽的連接,該方法根據肽鏈中Cys的位置,將整條肽鏈分成多條序列分別合成,終經過液相縮合反應得到目標肽,顯著地提高了終產物純度,廣泛適用于含有Cys的長鏈多肽的合成。
國肽生物擁有成熟的長肽合成工藝,能夠根據客戶定制的多肽序列,快速有效地設計合成方案并迅速開始合成,更快更好的為客戶提供所需的服務是我們不變的堅持。
國肽生物主要提供:多肽合成、多肽定制、同位素標記肽、人工胰島素、磷酸肽、生物素標記肽、熒光標記肽(Cy3、Cy5、Fitc、AMC等)、目錄肽、偶聯蛋白(KLH、BSA、OVA等)、美容肽、化妝品肽、多肽文庫構建、抗體服務、糖肽、訂書肽、藥物肽、RGD環肽等。詳情請咨詢國肽生物
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