有關色譜柱的內容，分為發展現狀、構成、分類、正確使用、維護、老化和再生幾個部分。

一 色譜柱的發展現狀

高效液相色譜(HPLC)是20世紀60年代后期發展起來的分離分析技術，是現代分離測定的重要手段。問世以來，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點但不能氣化的熱不穩定生理活性物質的特點而被廣泛應用于生物化學、藥物及臨床分析。

•色譜柱是高效液相色譜的心臟，在高效液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性，延長柱子的使用壽命非常重要。盡管經過數十年的發展,出現了各種各樣的色譜柱，如制備柱、分析柱和各種微型柱，但色譜柱主體上仍由柱體、柱內填料和兩端的接頭組成。由于使用了高效填料，并不需要很長的柱長，常規分析柱多為15~30 cm的直型柱。由于高效液相色譜柱要承受系統高壓,所以柱體一般選用金屬材質。大部分色譜柱的接頭為通用尺寸，可互換使用。

二 色譜柱的構成

•色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環)、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成，壓力不高于70kkg/cm2時，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內壁要求有很高的光潔度 。

•色譜柱兩端的柱接頭內裝有篩板，是燒結不銹鋼或欽合金，孔徑0.2一20µm(5一10µm)，取決于填料粒度，目的是防止填料漏出。

三 色譜柱的分類

•通常使用填充柱和毛細管柱兩類。

兩類柱子的區別

填充柱（銅&不銹鋼材料）   （玻璃材料）

毛細管柱

色譜柱按用途可分為分析型和制備型。

常用的色譜柱及其尺寸：

•(1)常規分析柱(常量柱)，內徑2—smm(常用4.6mm，國內有4mm和5mm)，柱長10—30cm；

•(2)窄徑柱，又稱細管徑柱、半微柱，內徑1—2mm，柱長10—20cm；

•(3)毛細管柱(又稱微柱)，內徑0.2—0.5mm；

•(4)半制備柱，內徑>5mm；

•(5)實驗室制備柱，內徑20—40mm,柱長10—30cm；

•(6)生產制備柱內徑可達幾十厘米。柱內徑一般是根據柱長、填料粒徑和折合流速來確定，目的是為了避免管壁效應。

四 色譜柱的正確使用

•加裝保護柱：保護柱屬消耗品，經過一定次數的樣品分析(50~100次)后，出現柱壓顯著升高或峰形變壞或基線漂移時，應考慮更換保護柱。

•過濾流動相和樣品 ：流動相通常由水或緩沖溶液與有機溶劑混合而成，原則上，所有經過色譜柱的流動相均應過濾，但在實際操作上應視具體情況而有所區別 。

•凈化樣品 ：樣品中含有對色譜柱有損害的化學成分，如產生吸附的蛋白質、糖等有機分子和強吸附性物質,以及可能對柱填料產生破壞作用的基團離子。在進樣前應盡可能對樣品進行分離提純以除去多余雜質組分。

•避免過高的柱壓 ：避免的方法為(1)柱壓過高時，盡可能采用較小的流速，以不超過柱允許壓力的一半為宜。(2)當流速較大時，應采取流速梯度的辦法使流速分步到位。(3)使用手動進樣閥時，進樣閥的切換要盡可能的快。 

•注意溫度和酸堿度 ：一般以硅膠為基質的色譜柱使用溫度不超過60℃，以低于40℃為宜，特別是在流動相pH接近使用限度時，更應降低使用溫度。目前的鍵合硅膠色譜柱標示的pH適用范圍可達2~10，但在實際使用時應避免的pH條件，特別是在偏堿性的條件(pH≥8)下使用。如必須要在的pH條件下使用時，可通過以下方法避免柱損害：(1)在泵和進樣閥之間加裝預柱(飽和柱)來飽和流動相；(2)降低使用溫度；(3)檢驗完畢后立即用與所使用的流動相互相混溶的“溫和溶劑”*清洗。

•正確及時的沖洗：始試驗前，了解柱中當前是何種溶劑。對于新色譜柱，如無特殊說明均為評價報告中所用流動相。柱中當前溶劑一定要與分析樣品所用流動相互溶，如不能混溶，要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過渡。異丙醇是能與各種溶劑混溶的試劑，可作為中介流動相使用。對于含有緩沖鹽的流動相，好的辦法是先用與分析用流動相組成*相同但不含緩沖鹽的溶液進行沖洗，再逐步過渡到純甲醇沖洗。 

五 色譜柱的維護

•柱的安裝與拆卸 ：色譜柱屬易耗品,需要不斷更換

•柱污染的處理 ：常見的柱污染有柱頭燒結濾板堵塞、柱頭內填料污染和柱內有鹽結晶析出。

•柱的貯存與管理 ：色譜柱長期不用時,應進行適當的處理后保存。 

六 色譜柱的老化

•目的：除去溶劑、水分、以及色譜柱制備過程中其他揮發性雜質；促進固定液均勻牢固的分布在擔體上。

•老化溫度的選擇應注意：足夠高以除去不揮發物質；足夠低以延長柱壽命和減少柱流失；溫度越低老化時間應越長；不超過色譜柱的上限使用溫度

•填充柱比毛細管柱應更經常、更嚴格的老化

•填充柱老化時間應長些，可過夜；毛細管柱老化只能是輕度的，時間應短些，防止固定液流失。

•老化好的色譜柱若不立即投入使用，應將其從柱箱中取出，兩端蓋上帽子，防止空氣、水分或其他雜質的進入。

七 色譜柱的再生

•反相柱的再生。采用以甲醇:水=95:5(V/V)，純甲醇，二氯甲烷等溶劑作流動相，順次沖洗，每種流動相流經色譜柱的量為20一30倍色譜柱體積然后再以相反順序沖洗色譜柱。

•正相柱再生。順次以正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作流動相沖洗色譜柱每步注意平衡溶劑的順序，不要顛倒每種流動相流經色譜柱的量為20—30倍柱體積(因異丙醇的粘度較大，沖洗過程中請隨時注意調整沖洗的流速)，用甲醇沖洗完后，再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必需嚴格脫水。 

•離子交換柱的再生。長時間在高pH值和高離子強度緩沖溶液中使用，將導致色譜柱離子交換能力降低。用稀酸緩沖溶液沖洗，可使陽離子柱再生;反之，用稀堿緩沖溶液沖洗，可使陰離子柱再生。