植物總酚檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:60%乙醇,自備。
試劑一:液體6mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體15mL×1 瓶,4℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明:
植物酚類(lèi)物質(zhì)具有清除自由基,抗氧化抗衰老的作用,具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和醫(yī)療保健作用而廣泛應(yīng)用于化妝品、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。
在堿性條件下,酚類(lèi)物質(zhì)將鎢鉬酸還原,產(chǎn)生藍(lán)色化合物,在760nm 處有特征吸收峰,測(cè)760nm 處的吸光值,即可得樣品總酚含量。
儀器設(shè)備(自備):
烘箱、粉碎儀、40目篩、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿。
操作步驟:
- 總酚提取:
將樣本烘干至恒重,粉碎,過(guò)40目篩之后,稱(chēng)取約0.1g,加入2.5mL提取液,用超聲提取法進(jìn)行提取,超聲功率300W,破碎5秒,間歇8秒,60℃,提取30min。12000rpm,25℃,離心10min,取上清,用提取液定容至2.5mL,待測(cè)。
2、測(cè)定操作表:
| 對(duì)照管 | 測(cè)定管 |
樣本待測(cè)液(mL) | 0.05 | 0.05 |
試劑一(mL) |
| 0.25 |
混勻,室溫靜置2min | ||
試劑二(mL) | 0.25 | 0.25 |
雙蒸水(mL) | 0.7 | 0.45 |
混勻,室溫靜置10 min,雙蒸水調(diào)零,波長(zhǎng)760nm,1mL比色皿, 測(cè)定各管吸光度值(ΔA760=A測(cè)定-A對(duì)照)。 |
計(jì)算公式:
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):y=5.615x+0.0012,R2=0.9994
總酚含量(mg/g組織)=(ΔA760-0.0012) ÷5.615×V反總÷(V樣÷V樣總×W)=8.905×(ΔA760-0.0012) ÷W
V 樣總:加入提取液體體積,2.5mL;V反總:反應(yīng)總體積,1mL;V 樣:反應(yīng)中樣品體,0.05mL;W:樣品質(zhì)量,g。
注意事項(xiàng):
- OD 值大于0.8,樣品適當(dāng)稀釋再測(cè)定,注意計(jì)算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
- 試劑一對(duì)皮膚有一定的刺激性,請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施。
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實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):
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