凱氏定氮法只能檢測蛋白質(zhì)中氮含量，不能檢測氨基酸的含量。其中蛋白質(zhì)含量也只是稱為粗蛋白質(zhì)的含量，只是用氮的含量乘以6.25（系數(shù)）得出，不是真正的蛋白質(zhì)的含量。

凱氏定氮法測氮的方法如下：

1、稱取0.5～1g試樣（含氮量5～80mg）準(zhǔn)確至0.0002g，無損失地放入凱氏燒瓶中，加入硫酸銅0.9g，無水硫酸鉀（或硫酸鈉）15g，與試樣混合均勻，再加硫酸25ml和2粒玻璃珠，在消煮爐士小心加熱，待樣品焦化，泡沫消失，再加強(qiáng)火力（360～410℃）直至溶液澄清后，再加熱消化15min。

2、氨的蒸餾

（1）常量直接茂餾法 將上述的試樣消煮液冷卻，加蒸餾水200ml，搖勻，冷卻。沿瓶壁小心加入40％氫氧化鈉溶液100ml，立即與蒸餾裝置相連．蒸餾裝置冷凝管的末端應(yīng)浸入50ml硼酸吸收液lcm。加混合指示劑2滴，輕搖凱氏燒瓶，使溶液混勻，加熱蒸餾，直至餾出液體積約150ml。先將吸收液取下，再停止加熱。

（2）半微量水蒸汽蒸餾法 上述試樣的消煮液冷卻，加蒸餾水20m1轉(zhuǎn)入100ml容量瓶，冷卻后用水稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。取2％硼酸溶液20ml，加混合指示劑2滴，使半微量蕉餾裝置的冷凝管末端浸入此溶液；蒸餾裝置的蒸汽發(fā)生器的水中應(yīng)加甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，且保持此液為橙紅色，否則應(yīng)補加少許硫酸。準(zhǔn)確移取試樣分解液10～20ml注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進(jìn)樣入口，塞好入口玻璃塞，再加10ml40％氫氧化鈉溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應(yīng)室，將玻璃塞塞好，并在入口處加水封密好，防止漏氣，蒸餾4min，使冷凝管末端離開吸收液面，用蒸餾水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。

3、滴定 用硼酸吸收氨后，立即用0.05mol