PCR實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)介

Pcr實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室、DNA實(shí)驗(yàn)室，基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡(jiǎn)稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA 段，可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過DNA基因追蹤系統(tǒng)，能迅速掌握患者體內(nèi)的含量，其度高達(dá)納米級(jí)別，檢測(cè)乙肝在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否復(fù)制、是否傳染、傳染性有多強(qiáng)、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時(shí)判斷病人*使用哪類抗病毒*物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗(yàn)依據(jù) 。

功能：能夠?qū)颊卟∏檫M(jìn)行科學(xué)、準(zhǔn)確、實(shí)時(shí)的掌控，并結(jié)合抗HBV與T細(xì)胞免疫來打破免疫耐受，阻斷肝病復(fù)制的療法、有效的分解肝炎，解決了乙肝易變異、耐藥，復(fù)制模板難以治療，人體免疫耐受狀態(tài)不易打破等醫(yī)學(xué)難題，能迅速消除臨床癥狀，而且有效抑制乙肝復(fù)制，明顯加快e抗原、抗體的轉(zhuǎn)換速度，殺滅及肝細(xì)胞內(nèi)的，為防止再感染提供了長(zhǎng)期保護(hù)，有效阻斷和逆轉(zhuǎn)肝纖維化、肝硬化進(jìn)程。 

建設(shè)方案

1、建立樣品準(zhǔn)備區(qū) 
這個(gè)區(qū)域門用作樣品的準(zhǔn)備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應(yīng)該采取預(yù)防措施：⑴PCR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作。⑵組織培養(yǎng)物、組織標(biāo)本和樣品都帶進(jìn)樣品準(zhǔn)備間處理，以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA。⑶用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。⑷DNA樣品應(yīng)該用有門的防護(hù)或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留。⑸大體積樣品應(yīng)該用單獨(dú)包裝的無菌一次性移液管吸取。⑹管子打開前都要簡(jiǎn)短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生，而且管子不能用力崩開，這樣會(huì)產(chǎn)生氣溶膠。⑺時(shí)候都應(yīng)該穿實(shí)驗(yàn)服和帶手套，手套要經(jīng)常更換，尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實(shí)驗(yàn)服要門用于樣品準(zhǔn)備間，經(jīng)常清洗。 
2、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會(huì)。為了避免這一問題，反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報(bào)道。 
3、建立前PCR區(qū)。 
該去門用于準(zhǔn)備各種反應(yīng)，這個(gè)區(qū)域必須保持干凈，而且沒有來自克隆和樣品準(zhǔn)備的污染。前PCR區(qū)必須要有試劑和準(zhǔn)備，特別是門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。 
4、PCR實(shí)驗(yàn)室試劑的操作。 
⑴所用的所有溶液都應(yīng)該沒有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。⑵所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的－新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的，并且是高壓。⑶在20℃到25℃貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。⑷所用試劑都應(yīng)該以大體積配制，實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。⑸所有試劑和樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的瓶子和管子。⑹新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn)⑺樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)該小心保存。 
5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物。 
⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃，在實(shí)驗(yàn)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。⑵如果你的實(shí)驗(yàn)室使用多套引物，以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì)，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。⑶作為一個(gè)規(guī)則，應(yīng)該保存一套陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性對(duì)照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且，你也希望通過使用一個(gè)已知的弱陽性樣品來驗(yàn)證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。⑷陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染，陰性對(duì)照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。⑸當(dāng)做陽性對(duì)照時(shí)，有兩個(gè)理由決定了應(yīng)該使用少數(shù)量的核酸。⑹由于必須有對(duì)照反應(yīng)，對(duì)照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮。 
6、控制污染的方法。 
已設(shè)計(jì)出很有力的酶學(xué)方法用來消除一種形式的污染—使用UNG，這一技術(shù)能有效地消除由PCR產(chǎn)物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線，這種方法不能*消除污染問題，但可以將污染降低幾個(gè)數(shù)量級(jí)。 
7、后PCR區(qū)PCR完成以后，需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù)，應(yīng)該留出一個(gè)門用于反應(yīng)后處理樣品的地方。后PCR活動(dòng)中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是門用于這一目的，決不能把實(shí)驗(yàn)室這一區(qū)域的試劑或儀器用于前PCR活動(dòng)

應(yīng)用場(chǎng)所

第三方醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所，司法鑒定機(jī)構(gòu)，臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)，刑偵技術(shù)鑒定機(jī)構(gòu)，農(nóng)牧業(yè)基因檢測(cè)，食品行業(yè)轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)，食品藥品監(jiān)督所，等

PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)備清單

（一）試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)
1、2-8C和-15C冰箱
2、混勻器
3、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）
4、移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）
5、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）
6、工作服和工作鞋
7、辦公用品

（二）標(biāo)本制備區(qū)
1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱
2、高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)
3、混允器
4、樣本滅活恒溫箱
5、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）
6、可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）
7、超凈工作臺(tái)
8、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）
9、工作服和工作鞋
10、辦公用品

如需處理大分子DNA，應(yīng)具有超聲波水浴儀。

（三）擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)
1、核酸擴(kuò)增儀
2、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）
3、可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）
4、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）
5、工作服和工作鞋
6、辦公用品

(四)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

視檢驗(yàn)方法不同而定。基本儀器設(shè)備如下：
1、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）
2、可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）
3、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）
4、工作服和工作鞋
5、辦公用品

案例圖片“