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ARPE19-LUC人視網(wǎng)膜上皮熒光素酶標(biāo)記細胞 處理方法

來源:上海琛藝實業(yè)有限公司   2020年06月11日 14:44  


細胞名稱:HUVEC-C-LUC人臍靜脈血管內(nèi)皮熒光素酶標(biāo)記細胞 處理方法 含STR鑒定

物種:大鼠

規(guī)格:T25培養(yǎng)瓶,1×106cells

形態(tài)特征:上皮細胞樣

生長特性:貼壁

產(chǎn)品描述

皮質(zhì)醇可抑制該細胞的生長。該細胞表達腸上皮*抗原,在20代以前保持恒定的生長速度和細胞形態(tài),此后生長速度迅速下降,細胞形態(tài)也發(fā)生改變。

培養(yǎng)條件:DMEM-H 5%FBS 0.01mg/ml Insulin

傳代方法:1:3-1:6傳代,每周換液2次。

ARPE19-LUC細胞復(fù)蘇時如何換液呢?

1凍存細胞取出后37℃速溶,取15ml離心管,加入10ml含血清培養(yǎng)基,將凍存管中液體(通常1.5ml)也加入離心管中,習(xí)慣輕吹幾下混勻,1200轉(zhuǎn)常溫離心5min,去掉上清,加入5ml含血清培養(yǎng)基,輕吹制成細胞懸液,加入到培養(yǎng)瓶中,即可。

注意,新復(fù)蘇的ARPE19-LUC細胞不要經(jīng)常去看去動。

換液的話,只要把培養(yǎng)基吸出,再加入新的培養(yǎng)基就可以了

如果你復(fù)蘇的細胞長得很不均勻,可以胰酶消化下來再混勻后在重新加進去(像正常細胞一樣做)。

兩種方案可供選擇:

一、復(fù)蘇時,行離心,棄上清后,種入瓶中。主要目的是防止DMSO對細胞造成損害,但剛復(fù)蘇的細胞教脆弱,離心易導(dǎo)致細胞破碎。

二、ARPE19-LUC細胞復(fù)蘇時,直接將凍存管里的液體倒入培養(yǎng)瓶中,另外添加適量的培養(yǎng)基,孵箱24h,待貼壁后行常規(guī)換液。省去了離心一步,避免離心時細胞破裂。但DMSO未能去除,長時間培養(yǎng)可能會對細胞有損害。個人覺得第二種方案較方便。

細胞傳代步驟: 如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞復(fù)蘇步驟: 將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

細胞凍存步驟: 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

細胞運輸: 干冰運輸(2ml凍存管)或活細胞運輸(T25細胞瓶)

HUVEC-C-LUC人臍靜脈血管內(nèi)皮熒光素酶標(biāo)記細胞 處理方法 含STR鑒定

1) 來源:人臍帶組織

 

2) 形態(tài):內(nèi)皮細胞

 

3) 含量:>1x106

 

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

 

5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

運輸和保存

 

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式

 

(1)干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;

(2)存活細胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

 

(3)收到細胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

 

IEC-6-LUC大鼠小腸引窩上皮熒光素酶標(biāo)記細胞 )用途:僅供科研使用。

 

細胞接收后的處理:

 

1) 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

 

2) 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準(zhǔn)確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

 

3) 觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

 

4) 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

 

5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基)。

 

6)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后次傳代建議1:2傳代 。   

 

一.IEC-6-LUC大鼠小腸引窩上皮熒光素酶標(biāo)記細胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

 

1) 準(zhǔn)備ECM培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,5%;添加對應(yīng)因子;雙抗,1%。

 

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

 

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

 

二. 細胞處理:

 

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天檢查細胞密度。

 

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

 

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

 

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

 

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

 

3. 按6ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

 

4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基瓶中。

 

注:di一次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

 

3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。

 

下面T25瓶為例;

 

1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

 

2.1000rpm離心分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。明舟生物(mingzhoubio)按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

 

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

 

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