細胞名稱：HUVEC-C-LUC人臍靜脈血管內皮熒光素酶標記細胞 處理方法 含STR鑒定

物種：大鼠

規格：T25培養瓶，1×106cells

形態特征：上皮細胞樣

生長特性：貼壁

產品描述

皮質醇可抑制該細胞的生長。該細胞表達腸上皮*抗原，在20代以前保持恒定的生長速度和細胞形態，此后生長速度迅速下降，細胞形態也發生改變。

培養條件：DMEM-H 5%FBS 0.01mg/ml Insulin

傳代方法：1:3-1:6傳代，每周換液2次。

ARPE19-LUC細胞復蘇時如何換液呢？

1凍存細胞取出后37℃速溶，取15ml離心管，加入10ml含血清培養基，將凍存管中液體（通常1.5ml）也加入離心管中，習慣輕吹幾下混勻，1200轉常溫離心5min，去掉上清，加入5ml含血清培養基，輕吹制成細胞懸液，加入到培養瓶中，即可。

注意，新復蘇的ARPE19-LUC細胞不要經常去看去動。

換液的話，只要把培養基吸出，再加入新的培養基就可以了

如果你復蘇的細胞長得很不均勻，可以胰酶消化下來再混勻后在重新加進去（像正常細胞一樣做）。

兩種方案可供選擇：

一、復蘇時，行離心，棄上清后，種入瓶中。主要目的是防止DMSO對細胞造成損害，但剛復蘇的細胞教脆弱，離心易導致細胞破碎。

二、ARPE19-LUC細胞復蘇時，直接將凍存管里的液體倒入培養瓶中，另外添加適量的培養基，孵箱24h，待貼壁后行常規換液。省去了離心一步，避免離心時細胞破裂。但DMSO未能去除，長時間培養可能會對細胞有損害。個人覺得第二種方案較方便。

細胞傳代步驟： 如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

細胞復蘇步驟： 將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

細胞凍存步驟： 待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

細胞運輸： 干冰運輸(2ml凍存管)或活細胞運輸（T25細胞瓶）

HUVEC-C-LUC人臍靜脈血管內皮熒光素酶標記細胞 處理方法 含STR鑒定

1） 來源：人臍帶組織

2） 形態：內皮細胞

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發現污染，請及時拍照與我們聯系。

IEC-6-LUC大鼠小腸引窩上皮熒光素酶標記細胞 ）用途：僅供科研使用。

細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查發貨培養瓶的狀況，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時，好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態的依據。

3） 觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象，如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基）。

6）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。  收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。   

一．IEC-6-LUC大鼠小腸引窩上皮熒光素酶標記細胞培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備ECM培養基；優質胎牛血清，5%；添加對應因子；雙抗，1%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜。第二天檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含6ml培養基瓶中。

注：di一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例；

1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2．1000rpm離心分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物（mingzhoubio）按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。