HUVEC-C-LUC人臍靜脈血管內皮熒光素酶標記細胞 處理方法說明書

現貨直銷，免費快遞送貨上門。公司供應各種細胞株，細胞系，種類齊全，現貨，質量保證，公司所有產品僅供科研使用，不得用于醫學診斷。

細胞名稱 
形態特性  上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 
培養條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權限 未定
運輸保存：
采用干冰保存運輸。收到細胞時，若干冰已經*融化，請立即將細胞復蘇培養；若尚留有干冰，請立即將細胞放入液氮中保存待用，請按條件貯存細胞，切不可將細胞置于高溫環境。
保存條件：4℃保存一年;-20℃長期保存
用途：只可用于科研。
儲存：液氮。
運輸：干冰(第二代培養末期液氮凍存)。
細胞一般2-3天更換一次培養基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一，周三，周五更換培養基。
注意：次植入后，在6-16小時內更換培養基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡細胞。到達客戶手中，出現任何問題（人為或者非人為），導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。對于細胞的真實性，支持客戶檢測對應的biomarker，（如證明細胞錯誤，全額退款。）公司針對每株細胞，鑒定gene background，鑒定完成的細胞可以提供數據，用于證明細胞的真實性，并且幫助客戶更多的了解細胞特性。

HUVEC-C-LUC人臍靜脈血管內皮熒光素酶標記細胞 處理方法說明書操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。分枝桿菌 RNAout50 次

專業技術人員萬工收藏的細胞培養小技巧:

1. 買細胞要去靠譜的地方買，比如 ATCC 或者琛藝實業。一般上面會有針對細胞的介紹，這樣培養之前可以了解細胞正常生長的狀態圖、傳代、培養基的類型等。

2. 不管是買的細胞，還是別人惠贈的細胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測是否有支原體污染;迅速擴增凍存，凍存細胞復蘇后第二天*更換一次培養基。

3. 發現細胞有污染迅速處理掉，特別是當你養了很多種細胞時。細菌污染、真菌污染很容易發現，支原體污染的話，細胞會長的慢，可以買個支原體檢測的試劑盒定期檢測一下。

4. 不同細胞生長周期不同。有的生長很快，比如說 MDA-MB-231，傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經足夠了。有的又是特別慢，比如 BT474，傳代是一分二，復蘇起始的時候兩周多才能長滿。這就需要要在培養細胞的過程中多多摸索。

5. 對于嬌弱的細胞，就得細心呵護。胰酶消化不能過久，吹得時候要輕柔，離心時候也要注意轉速和時間。每天都要去看一下細胞，肉眼觀察培養基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況。記住，是每天。