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HUVEC-C-LUC人臍靜脈血管內(nèi)皮熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 處理方法

來(lái)源:上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司   2020年06月10日 10:54  

HUVEC-C-LUC人臍靜脈血管內(nèi)皮熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 處理方法說(shuō)明書(shū)

現(xiàn)貨直銷,免費(fèi)快遞送貨上門(mén)。公司供應(yīng)各種細(xì)胞株,細(xì)胞系,種類齊全,現(xiàn)貨,質(zhì)量保證,公司所有產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

產(chǎn)品名稱

HUVEC-C-LUC人臍靜脈血管內(nèi)皮熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 

用途

僅用科研

保存條件

4℃保存一年;-20℃長(zhǎng)期保存

 

細(xì)胞名稱 
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞屬保藏,其特征特性尚未公開(kāi)。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定
運(yùn)輸保存:
采用干冰保存運(yùn)輸。收到細(xì)胞時(shí),若干冰已經(jīng)*融化,請(qǐng)立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng);若尚留有干冰,請(qǐng)立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用,請(qǐng)按條件貯存細(xì)胞,切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。
保存條件:4℃保存一年;-20℃長(zhǎng)期保存
用途:只可用于科研。
儲(chǔ)存:液氮。
運(yùn)輸:干冰(第二代培養(yǎng)末期液氮凍存)。
細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基,這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一,周三,周五更換培養(yǎng)基。
注意:次植入后,在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基,以去除殘留的二甲基亞楓和死亡細(xì)胞。到達(dá)客戶手中,出現(xiàn)任何問(wèn)題(人為或者非人為),導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。對(duì)于細(xì)胞的真實(shí)性,支持客戶檢測(cè)對(duì)應(yīng)的biomarker,(如證明細(xì)胞錯(cuò)誤,全額退款。)公司針對(duì)每株細(xì)胞,鑒定gene background,鑒定完成的細(xì)胞可以提供數(shù)據(jù),用于證明細(xì)胞的真實(shí)性,并且?guī)椭蛻舾嗟牧私饧?xì)胞特性。


HUVEC-C-LUC人臍靜脈血管內(nèi)皮熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 處理方法說(shuō)明書(shū)操作步驟:
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。分枝桿菌 RNAout50 次

專業(yè)技術(shù)人員萬(wàn)工收藏的細(xì)胞培養(yǎng)小技巧:

1. 買細(xì)胞要去靠譜的地方買,比如 ATCC 或者琛藝實(shí)業(yè)。一般上面會(huì)有針對(duì)細(xì)胞的介紹,這樣培養(yǎng)之前可以了解細(xì)胞正常生長(zhǎng)的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。

2. 不管是買的細(xì)胞,還是別人惠贈(zèng)的細(xì)胞,剛拿到手趕緊的做兩件事:檢測(cè)是否有支原體污染;迅速擴(kuò)增凍存,凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天*更換一次培養(yǎng)基。

3. 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處理掉,特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時(shí)。細(xì)菌污染、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn),支原體污染的話,細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)的慢,可以買個(gè)支原體檢測(cè)的試劑盒定期檢測(cè)一下。

4. 不同細(xì)胞生長(zhǎng)周期不同。有的生長(zhǎng)很快,比如說(shuō) MDA-MB-231,傳代的時(shí)候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了。有的又是特別慢,比如 BT474,傳代是一分二,復(fù)蘇起始的時(shí)候兩周多才能長(zhǎng)滿。這就需要要在培養(yǎng)細(xì)胞的過(guò)程中多多摸索。

5. 對(duì)于嬌弱的細(xì)胞,就得細(xì)心呵護(hù)。胰酶消化不能過(guò)久,吹得時(shí)候要輕柔,離心時(shí)候也要注意轉(zhuǎn)速和時(shí)間。每天都要去看一下細(xì)胞,肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況。記住,是每天。

 

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