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SNU-5-LUC人胃癌熒光素酶標記細胞 處理方法

來源:上海琛藝實業有限公司   2020年06月06日 10:19  

上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發、生產、經營為一體的專業化生物工程公司。公司新引進細胞上千株,其中人的已通過STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購。。。。。。

產品名稱:SNU-5-LUC人胃癌熒光素酶標記細胞 處理方法 含STR鑒定

特點:細胞代數為4代以內,細胞耐藥倍數8倍以上;
包裝:內層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運輸方式:快遞運輸
售后:收到細胞后12天,如發現細胞有質量問題(如污染,死亡,快遞運輸等原因)時,應出具書面質量問題報告并及時通知銷售人員,我們將盡快為您解決!

注:耐藥細胞培養操作流程和普通細胞培養方法基本一致,只是在培養中會加藥維持篩選壓力

  • SNU-5-LUC人胃癌熒光素酶標記細胞 處理方法 含STR鑒定
  •  
  • 三、細胞生長條件:

 

  • 組成:

組份

數目

細胞

 1 T-25瓶

細胞說明書

一份

  • 細胞簡介:

生長特性:

貼壁生長

 

細胞來源:

從ATCC/中科院/協和醫院等地引進

培養條件

培養基:90%1640培養基 +10%FBS(推薦BI  -04-001-1ACS*胎牛血清)

氣相:空氣95%,二氧化碳5%

溫度:37℃

培養:

  • 貼壁細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,將其平躺置于培養箱中進行2-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養基并置于細胞培養箱中培養,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代;

2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進行傳代,第yi次傳代比例為1:2。

3傳代步驟:將0.25%含EDTA胰酶置于37°預熱,倒掉培養瓶中的培養基,往培養瓶中加入1mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預熱好的胰酶,置于37°孵育消化(第yi次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為消化時間,記錄消化時間,以便于下次消化),消化好后加入1ml*培養基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后收集細胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養基重懸細胞,進行傳代。

 

二、懸浮細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,然后置于無菌操作臺,打開瓶口,輕輕吹打后,將其中的細胞懸液轉移到離心管中,然后1200rpm離心3min,去上清;

2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鮮培養基,然后將其置于細胞培養箱中培養,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液(離心后去舊液,加入新鮮培養基);

3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時,對其進行傳代,第yi次傳代比例為1:2(離心后平均分成兩瓶培養)。

 

細胞總數:

1~3*106

傳代周期:

2-3天

傳代比例:

1:2~1:4

換液頻率:

2-3天

凍存液:

90%FBS+10%DMSO

 


@geraldor:你好,你的意思是紫外線照過之后,實驗操作開始了,如果萬一發現少拿了什么,就直接酒精噴一下再放進去是嗎

@llh12:有時確實是忘記,*怕的就是那種實驗已經做到一半忘記了的,或者發現東西不夠用的。我們一般是這樣處理:耗材、移液槍還有金屬器皿之類的,可以噴一下酒精放進來,等酒精風干一下,注意不要和其它東西混雜。反正一般細胞的也有外包裝,里面已經是無菌無內毒素。如果是試劑,那就是直接從冰箱拿出來放進來就是。(如果只是實驗還沒有真的開始,把漏掉的東西加上,再照30分鐘就是。)

 

@姚麗佳:請問MHCC97H-GFP-LC3細胞傳代前,經過胰酶處理后,加了培養基后不用離心直接分瓶嗎?那后面培養的時候不就含有胰蛋白酶了嗎?不會產生影響嗎?

@llh12:是的,不用離心直接分瓶。之后加入含血清的培養基中止了胰酶作用。如果是貼壁細胞,一般第二天就貼壁了。分瓶后第二天再全部換液。如果是半懸浮細胞,一般都不用胰酶消化,都是直接吹下來。

MHCC97H-GFP細胞

 

1.【無菌環境】 在MHCC97H-GFP-LC3細胞細胞實驗之前要注意無菌環境的建立,紫外殺毒滅菌,酒精消毒都是十分有必要的。

2.【鏡下檢查】 鏡下檢查結果非常重要,鏡檢的結果非常重要,要根據你自己的觀察進行細胞密度的識別,從而進行細胞傳代比例的確定,進行更好的細胞數量的控制,如果實驗要求比較高,需要細胞計數板計數。

3.【過火焰】

記住,所有開瓶的東西都要進行過酒精燈外焰,瞬間高溫進行灰塵的固定。這樣會大大減少染菌幾率。

4.【移液工具】

很多人對于移液工具都有偏好,不好說什么就是正確的。但是從無菌角度。使用移液管比微量移液槍減少污染的幾率要高。希望大家能用移液管。

5.【交叉污染】

混勻細胞懸液和移取培養基以及血清的工具要分開;還有就是胰酶和血清也要嚴格分開,否則容易造成交叉感染,使細胞增加染菌幾率。

T47D-LUC人乳腺癌細胞-熒光素酶標記
T47D-GFP人乳腺癌細胞-綠色標記
Tca-8113-LUC人舌癌細胞-熒光素酶標記
Tca-8113-GFP人舌癌細胞-綠色標記
TE-10-LUC人食管癌細胞-熒光素酶標記
TE-10-GFP人食管癌細胞-綠色標記
TE-11-LUC人食管癌細胞-熒光素酶標記
TE-11-GFP人食管癌細胞-綠色標記
TE-13-LUC人食管癌細胞-熒光素酶標記
TE-13-GFP人食管癌細胞-綠色標記
U-2OS-LUC人骨肉瘤細胞-熒光素酶標記
U-2OS-GFP人骨肉瘤細胞-綠色標記
U251-LUC人神經膠質瘤細胞-熒光素酶標記
U251-GFP人神經膠質瘤細胞-綠色標記
U87MG-LUC人惡性膠質母細胞瘤細胞

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