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SNU-5-LUC人胃癌熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 處理方法

來源:上海琛藝實業(yè)有限公司   2020年06月06日 10:19  

上海琛藝實業(yè)有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進細(xì)胞上千株,其中人的已通過STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購。。。。。。

產(chǎn)品名稱:SNU-5-LUC人胃癌熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 處理方法 含STR鑒定

特點:細(xì)胞代數(shù)為4代以內(nèi),細(xì)胞耐藥倍數(shù)8倍以上;
包裝:內(nèi)層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細(xì)胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運輸方式:快遞運輸
售后:收到細(xì)胞后12天,如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題(如污染,死亡,快遞運輸?shù)仍颍r,應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報告并及時通知銷售人員,我們將盡快為您解決!

注:耐藥細(xì)胞培養(yǎng)操作流程和普通細(xì)胞培養(yǎng)方法基本一致,只是在培養(yǎng)中會加藥維持篩選壓力

  • SNU-5-LUC人胃癌熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 處理方法 含STR鑒定
  •  
  • 三、細(xì)胞生長條件:

 

  • 組成:

組份

數(shù)目

細(xì)胞

 1 T-25瓶

細(xì)胞說明書

一份

  • 細(xì)胞簡介:

生長特性:

貼壁生長

 

細(xì)胞來源:

從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基:90%1640培養(yǎng)基 +10%FBS(推薦BI  -04-001-1ACS*胎牛血清)

氣相:空氣95%,二氧化碳5%

溫度:37℃

培養(yǎng):

  • 貼壁細(xì)胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行2-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代;

2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進行傳代,第yi次傳代比例為1:2。

3傳代步驟:將0.25%含EDTA胰酶置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預(yù)熱好的胰酶,置于37°孵育消化(第yi次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為消化時間,記錄消化時間,以便于下次消化),消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后收集細(xì)胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,進行傳代。

 

二、懸浮細(xì)胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,然后置于無菌操作臺,打開瓶口,輕輕吹打后,將其中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,然后1200rpm離心3min,去上清;

2.將離心好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基,然后將其置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液(離心后去舊液,加入新鮮培養(yǎng)基);

3.顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)目比較多時,對其進行傳代,第yi次傳代比例為1:2(離心后平均分成兩瓶培養(yǎng))。

 

細(xì)胞總數(shù):

1~3*106

傳代周期:

2-3天

傳代比例:

1:2~1:4

換液頻率:

2-3天

凍存液:

90%FBS+10%DMSO

 


@geraldor:你好,你的意思是紫外線照過之后,實驗操作開始了,如果萬一發(fā)現(xiàn)少拿了什么,就直接酒精噴一下再放進去是嗎

@llh12:有時確實是忘記,*怕的就是那種實驗已經(jīng)做到一半忘記了的,或者發(fā)現(xiàn)東西不夠用的。我們一般是這樣處理:耗材、移液槍還有金屬器皿之類的,可以噴一下酒精放進來,等酒精風(fēng)干一下,注意不要和其它東西混雜。反正一般細(xì)胞的也有外包裝,里面已經(jīng)是無菌無內(nèi)毒素。如果是試劑,那就是直接從冰箱拿出來放進來就是。(如果只是實驗還沒有真的開始,把漏掉的東西加上,再照30分鐘就是。)

 

@姚麗佳:請問MHCC97H-GFP-LC3細(xì)胞傳代前,經(jīng)過胰酶處理后,加了培養(yǎng)基后不用離心直接分瓶嗎?那后面培養(yǎng)的時候不就含有胰蛋白酶了嗎?不會產(chǎn)生影響嗎?

@llh12:是的,不用離心直接分瓶。之后加入含血清的培養(yǎng)基中止了胰酶作用。如果是貼壁細(xì)胞,一般第二天就貼壁了。分瓶后第二天再全部換液。如果是半懸浮細(xì)胞,一般都不用胰酶消化,都是直接吹下來。

MHCC97H-GFP細(xì)胞

 

1.【無菌環(huán)境】 在MHCC97H-GFP-LC3細(xì)胞細(xì)胞實驗之前要注意無菌環(huán)境的建立,紫外殺毒滅菌,酒精消毒都是十分有必要的。

2.【鏡下檢查】 鏡下檢查結(jié)果非常重要,鏡檢的結(jié)果非常重要,要根據(jù)你自己的觀察進行細(xì)胞密度的識別,從而進行細(xì)胞傳代比例的確定,進行更好的細(xì)胞數(shù)量的控制,如果實驗要求比較高,需要細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)。

3.【過火焰】

記住,所有開瓶的東西都要進行過酒精燈外焰,瞬間高溫進行灰塵的固定。這樣會大大減少染菌幾率。

4.【移液工具】

很多人對于移液工具都有偏好,不好說什么就是正確的。但是從無菌角度。使用移液管比微量移液槍減少污染的幾率要高。希望大家能用移液管。

5.【交叉污染】

混勻細(xì)胞懸液和移取培養(yǎng)基以及血清的工具要分開;還有就是胰酶和血清也要嚴(yán)格分開,否則容易造成交叉感染,使細(xì)胞增加染菌幾率。

T47D-LUC人乳腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記
T47D-GFP人乳腺癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記
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TE-11-LUC人食管癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記
TE-11-GFP人食管癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記
TE-13-LUC人食管癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記
TE-13-GFP人食管癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記
U-2OS-LUC人骨肉瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記
U-2OS-GFP人骨肉瘤細(xì)胞-綠色標(biāo)記
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U251-GFP人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞-綠色標(biāo)記
U87MG-LUC人惡性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

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