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感覺(jué)態(tài)細(xì)胞的制備和注意事項(xiàng)
經(jīng)過(guò)一系列處理后，變?yōu)橐子谖胀庠碊NA的狀態(tài)，稱為感覺(jué)態(tài)細(xì)胞。
表面正電荷增加，膜和壁的通透性增加，能夠非選擇性的吸附并攝取外源DNA。
同時(shí)，由于感受態(tài)細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整，敏感性增加，過(guò)于激烈的操作會(huì)使其破裂，因此操作時(shí)應(yīng)注意動(dòng)作輕柔。
感覺(jué)態(tài)細(xì)胞在基因工程實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)常要使用各種細(xì)胞進(jìn)行DNA的轉(zhuǎn)化操作。轉(zhuǎn)化指同源、異源的“裸露”的DNA分子被細(xì)胞攝取并得到表達(dá)的基因水平轉(zhuǎn)移過(guò)程。制備是分子生物學(xué)研究中的一個(gè)重要環(huán)節(jié),其制備質(zhì)量的好壞直接影響到后續(xù)實(shí)驗(yàn)工作的進(jìn)行。
注意事項(xiàng)：
1.制作時(shí)應(yīng)使用的玻璃器皿或塑料容器。洗刷這些玻璃器皿或塑料容器時(shí)應(yīng)盡量洗凈。由于微量的洗滌劑或污染物都可能降低細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率，因此在洗刷完用于制作細(xì)胞的玻璃器皿或塑料容器后，用去離子水浸泡一晚，然后再充分洗凈。
2.制作時(shí)使用的菌種，不應(yīng)使用4℃或常溫保存的傳代細(xì)菌。應(yīng)使用-70℃保存的菌種，在LB抗生素平板培養(yǎng)基上分級(jí)劃線培養(yǎng)后，挑取單菌落。使用這種菌種制作的感覺(jué)態(tài)細(xì)胞，能提高轉(zhuǎn)化效率。
3.菌體的濃度是影響感受態(tài)效率高低的主要因素，適于本法的菌體濃度應(yīng)在OD600值0.05-0.11之間。
4.用于制備的菌體培養(yǎng)停止后要立即處理，不要將培養(yǎng)液過(guò)長(zhǎng)時(shí)間室溫放置，在冰中放置時(shí)也不要時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
5.制備操作過(guò)程中，離心后棄上清時(shí)要盡量棄盡，否則會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
6.主要的轉(zhuǎn)化操作都是無(wú)菌操作，并且在冰上進(jìn)行。
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