對(duì)于絕大多數(shù)的可溶性蛋白抗原,我們可以制備全長(zhǎng)的蛋白抗原以免疫動(dòng)物制備抗體,但是對(duì)于那些依托雙脂層膜結(jié)構(gòu)建立起來(lái)的多次跨膜蛋白,抗體的制備就沒(méi)那么簡(jiǎn)單了。比如G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)蛋白就是一個(gè)典型的大型、多次跨膜的重要蛋白家族,它是許多疾病的病理信號(hào)參與者,同時(shí)也是近一半現(xiàn)代藥物的作用靶點(diǎn)。然而要想制備GPCR的抗體確實(shí)非常困難,這主要有兩方面因素造成,一是眾多的跨膜區(qū)間造成蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)被分割成彼此間隔在細(xì)胞膜內(nèi)外兩側(cè)的多個(gè)區(qū)域,而人為去掉這些結(jié)構(gòu)則會(huì)造成蛋白構(gòu)象喪失原有形態(tài);二是表達(dá)量極低,由于作為膜通道,在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮關(guān)鍵作用,人為過(guò)表達(dá)外源的GPCR,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞信號(hào)紊亂,極易造成細(xì)胞死亡,所以我們很難制備得到采用全蛋白所需的少蛋白計(jì)量。
艾柏森生物通過(guò)多年的項(xiàng)目實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),積累了數(shù)種多次跨膜蛋白抗體制備方法,包括經(jīng)典的可溶區(qū)蛋白設(shè)計(jì)方案,重組蛋白免疫方案,以及公司技術(shù)人員開(kāi)發(fā)的基于全細(xì)胞免疫的抗體制備方案,以小的試驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn),獲得優(yōu)品質(zhì)的抗體,為客戶量身打造好的抗體制備思路。
★ 服務(wù)組合
★ 經(jīng)典案例(兩次跨膜蛋白抗體制備 Twice Transmembrane antibody service)
HeLa cells weretransfected with plasmids encoding FUNDC1–Myc for the indicated times and themitochondrial (TIM23, TOM20, VDAC1), endoplasmic reticulum (calnexin) and Golgimarker (GM130) proteins were detected by western blotting.
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