真菌/酵母細胞樣品細胞周期SYTOX綠色熒光流式細胞分析試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

  真菌/酵母細胞樣品細胞周期SYTOX綠色熒光流式細胞分析試劑是一種旨在通過細胞流式儀測定真菌/酵母細胞中DNA結合SYTOX綠色染料程度，來定量DNA含量，以進一步獲取細胞周期分布狀況的*而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種真菌/酵母細胞，包括芽殖酵母、裂殖酵母等的細胞周期分析。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、細胞分裂、代謝等的研究。產品嚴格無菌，即到即用，分辨率高，操作簡捷，性能穩定。

技術背景

芽殖酵母（Saccharomyces cerevisiae）、裂殖酵母（Schizosacchromyces pombe）是研究真核生物細胞周期的模式生物。細胞周期是評價細胞代謝、生理和病理狀況的重要指標。通過DNA結合染料，借助細胞流式儀，測定出DNA含量，根據DNA含量隨著細胞周期的不同而發生變化，來確定和區別細胞周期的不同階段。流式細胞術（FLOW CYTOMETRY）是七十年代發展起來的集計算機、激光、流體力學、細胞化學、細胞免疫學為一體的高科學技術。凋亡細胞是在正常G0/G1峰細胞群前出現亞二倍體峰（sub-G1）細胞群。SYTOX綠色染料具有不受細胞數量變化、染料濃度變化、細胞形態和大小變化，以及細胞培養液不同等影響，且不易滲漏等優點。

產品內容

  清理液（Reagent A）     毫升

  固著液（Reagent B）     毫升

  抗干擾液（Reagent C）     毫升

  酶解液（Reagent D）     毫升

  染色液（Reagent E）     毫升

產品說明書     1份

保存方法

保存  抗干擾液（Reagent C）、  酶解液（Reagent D）和  染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；  染色液（Reagent E）避免光照，有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

2毫升離心管：用于細胞染色的容器

（微型）臺式離心機：用于樣品操作操作

培養箱或恒溫水槽：用于反應孵育

細胞流式儀：用于細胞熒光分析

實驗步驟

• 準備好5 X 10⁶的待測真菌/酵母細胞 
• 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升  清理液（Reagent A）到15毫升錐形離心管，混勻
• 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g 
• 小心抽去上清液
• 緩慢加入xx毫升預冷的  固著液（Reagent B），且渦旋震蕩混勻
• 放進4℃冰箱里孵育16小時
• 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g 
• 小心抽去固著液
• 加入xx毫升  清理液（Reagent A）到15毫升錐形離心管，混勻
• 移入到2毫升離心管
• 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
• 重復清洗一次
• 加入xx微升  抗干擾液（Reagent C），混勻
• 放進37℃恒溫水槽，孵育2至16小時
• 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
• 加入xx微升  酶解液（Reagent D），混勻
• 放進37℃恒溫水槽，孵育20分鐘
• 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
• 加入xx微升  清理液（Reagent A），混勻
• 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g 
• 小心抽去上清液
• 加入xx微升  染色液（Reagent D），混勻細胞顆粒群
• 超聲處理100瓦，30%功率，15秒
• 在暗室里37℃培養箱里孵育30分鐘
• 移入到細胞流式儀測試管（可放進4℃冰箱里待測）
• 即刻進行細胞流式儀分析：波長488nm氬離子激光出現綠色熒光（或488nm激發波長，530nm散發波長），觀察50000個細胞以上

注意事項

• 本產品為50次操作
• 操作時，須戴手套
• 孵育時，必須避免光照
• 建議細胞染色完成后，即刻進行細胞流式儀分析。如果放進4℃冰箱里待測，不要超過1周
• 細胞流式儀分析前，須混勻內容物，或超聲處理，避免細胞成團
• 細胞檢測量不得少于10000個
• 告知流式儀技術員有關細胞類型
• 使用未經染色的細胞進行FSC與SSC設定，然后將染色細胞調整到未經染色細胞的水平，包括FL1、FL2、FL3的PMT
• 建議設定：

Detector FSC E00  Gain：2

Detector FL1-A Voltage：400  Gain：4

流速：500/秒

• 本公司提供系列細胞周期分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定熒光清晰