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真菌/酵母細胞樣品細胞周期SYTOX綠色熒光流式細胞分析試劑盒

來源:銘修(上海)生物科技有限公司   2020年05月08日 11:27  

真菌/酵母細胞樣品細胞周期SYTOX綠色熒光流式細胞分析試劑盒產品說明書(中文版)

 

主要用途

 

  真菌/酵母細胞樣品細胞周期SYTOX綠色熒光流式細胞分析試劑是一種旨在通過細胞流式儀測定真菌/酵母細胞中DNA結合SYTOX綠色染料程度,來定量DNA含量,以進一步獲取細胞周期分布狀況的*而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種真菌/酵母細胞,包括芽殖酵母、裂殖酵母等的細胞周期分析。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、細胞分裂、代謝等的研究。產品嚴格無菌,即到即用,分辨率高,操作簡捷,性能穩定。

技術背景

 

芽殖酵母(Saccharomyces cerevisiae)、裂殖酵母(Schizosacchromyces pombe)是研究真核生物細胞周期的模式生物。細胞周期是評價細胞代謝、生理和病理狀況的重要指標。通過DNA結合染料,借助細胞流式儀,測定出DNA含量,根據DNA含量隨著細胞周期的不同而發生變化,來確定和區別細胞周期的不同階段。流式細胞術(FLOW CYTOMETRY)是七十年代發展起來的集計算機、激光、流體力學、細胞化學、細胞免疫學為一體的高科學技術。凋亡細胞是在正常G0/G1峰細胞群前出現亞二倍體峰(sub-G1)細胞群。SYTOX綠色染料具有不受細胞數量變化、染料濃度變化、細胞形態和大小變化,以及細胞培養液不同等影響,且不易滲漏等優點。

產品內容

 

  清理液(Reagent A)     毫升

  固著液(Reagent B)     毫升

  抗干擾液(Reagent C)     毫升

  酶解液(Reagent D     毫升

  染色液(Reagent E     毫升

產品說明書     1份

保存方法

保存  抗干擾液(Reagent C)  酶解液(Reagent D)和  染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;  染色液(Reagent E避免光照,有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器

2毫升離心管:用于細胞染色的容器

(微型)臺式離心機:用于樣品操作操作

培養箱或恒溫水槽:用于反應孵育

細胞流式儀:用于細胞熒光分析

實驗步驟

  • 準備好5 X 106的待測真菌/酵母細胞 
  • 放進微型臺式離心機離心1分鐘,速度為16000g
  • 小心抽去上清液
  • 加入xx毫升  清理液(Reagent A)到15毫升錐形離心管混勻
  • 放進微型臺式離心機離心1分鐘,速度為16000g 
  • 小心抽去上清液
  • 緩慢加入xx毫升預冷的  固著液(Reagent B)且渦旋震蕩混勻
  • 放進4℃冰箱里孵育16小時
  • 放進微型臺式離心機離心1分鐘,速度為16000g 
  • 小心抽去固著液
  • 加入xx毫升  清理液(Reagent A)到15毫升錐形離心管混勻
  • 移入到2毫升離心管
  • 放進微型臺式離心機離心1分鐘,速度為16000g
  • 重復清洗一次
  • 加入xx微  抗干擾液(Reagent C混勻
  • 放進37恒溫水槽,孵育2至16小時
  • 放進微型臺式離心機離心1分鐘,速度為16000g
  • 加入xx微  酶解液(Reagent D混勻
  • 放進37恒溫水槽,孵育20分鐘
  • 放進微型臺式離心機離心1分鐘,速度為16000g
  • 加入xx微  清理液(Reagent A)混勻
  • 放進微型臺式離心機離心1分鐘,速度為16000g 
  • 小心抽去上清液
  • 加入xx微升  染色液(Reagent D),混勻細胞顆粒群
  • 超聲處理100瓦,30%功率,15秒
  • 在暗室里37培養箱里孵育30分鐘
  • 移入到細胞流式儀測試管(可放進4℃冰箱里待測)
  • 即刻進行細胞流式儀分析:波長488nm氬離子激光出現色熒光(或488nm激發波長,530nm散發波長)觀察50000個細胞以上

注意事項

  • 本產品為50次操作
  • 操作時,須戴手套
  • 孵育時,必須避免光照
  • 建議細胞染色完成后,即刻進行細胞流式儀分析。如果放進4℃冰箱里待測,不要超過1周
  • 細胞流式儀分析前,須混勻內容物,或超聲處理,避免細胞成團
  • 細胞檢測量不得少于10000個
  • 告知流式儀技術員有關細胞類型
  • 使用未經染色的細胞進行FSC與SSC設定,然后將染色細胞調整到未經染色細胞的水平,包括FL1、FL2、FL3的PMT
  • 建議設定:

Detector FSC E00  Gain:2

Detector FL1-A Voltage:400  Gain:4

流速:500/秒

  • 本公司提供系列細胞周期分析試劑產品

 

質量標準

 

  • 本產品經鑒定性能穩定
  • 本產品經鑒定熒光清晰

免責聲明

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