真菌/酵母細(xì)胞樣品細(xì)胞周期SYTOX綠色熒光流式細(xì)胞分析試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

  真菌/酵母細(xì)胞樣品細(xì)胞周期SYTOX綠色熒光流式細(xì)胞分析試劑是一種旨在通過(guò)細(xì)胞流式儀測(cè)定真菌/酵母細(xì)胞中DNA結(jié)合SYTOX綠色染料程度，來(lái)定量DNA含量，以進(jìn)一步獲取細(xì)胞周期分布狀況的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種真菌/酵母細(xì)胞，包括芽殖酵母、裂殖酵母等的細(xì)胞周期分析。可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、細(xì)胞分裂、代謝等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，分辨率高，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

芽殖酵母（Saccharomyces cerevisiae）、裂殖酵母（Schizosacchromyces pombe）是研究真核生物細(xì)胞周期的模式生物。細(xì)胞周期是評(píng)價(jià)細(xì)胞代謝、生理和病理狀況的重要指標(biāo)。通過(guò)DNA結(jié)合染料，借助細(xì)胞流式儀，測(cè)定出DNA含量，根據(jù)DNA含量隨著細(xì)胞周期的不同而發(fā)生變化，來(lái)確定和區(qū)別細(xì)胞周期的不同階段。流式細(xì)胞術(shù)（FLOW CYTOMETRY）是七十年代發(fā)展起來(lái)的集計(jì)算機(jī)、激光、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)為一體的高科學(xué)技術(shù)。凋亡細(xì)胞是在正常G0/G1峰細(xì)胞群前出現(xiàn)亞二倍體峰（sub-G1）細(xì)胞群。SYTOX綠色染料具有不受細(xì)胞數(shù)量變化、染料濃度變化、細(xì)胞形態(tài)和大小變化，以及細(xì)胞培養(yǎng)液不同等影響，且不易滲漏等優(yōu)點(diǎn)。

產(chǎn)品內(nèi)容

  清理液（Reagent A）     毫升

  固著液（Reagent B）     毫升

  抗干擾液（Reagent C）     毫升

  酶解液（Reagent D）     毫升

  染色液（Reagent E）     毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)     1份

保存方法

保存  抗干擾液（Reagent C）、  酶解液（Reagent D）和  染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；  染色液（Reagent E）避免光照，有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

2毫升離心管：用于細(xì)胞染色的容器

（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作操作

培養(yǎng)箱或恒溫水槽：用于反應(yīng)孵育

細(xì)胞流式儀：用于細(xì)胞熒光分析

實(shí)驗(yàn)步驟

• 準(zhǔn)備好5 X 10⁶的待測(cè)真菌/酵母細(xì)胞 
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心1分鐘，速度為16000g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升  清理液（Reagent A）到15毫升錐形離心管，混勻
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心1分鐘，速度為16000g 
• 小心抽去上清液
• 緩慢加入xx毫升預(yù)冷的  固著液（Reagent B），且渦旋震蕩混勻
• 放進(jìn)4℃冰箱里孵育16小時(shí)
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心1分鐘，速度為16000g 
• 小心抽去固著液
• 加入xx毫升  清理液（Reagent A）到15毫升錐形離心管，混勻
• 移入到2毫升離心管
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心1分鐘，速度為16000g
• 重復(fù)清洗一次
• 加入xx微升  抗干擾液（Reagent C），混勻
• 放進(jìn)37℃恒溫水槽，孵育2至16小時(shí)
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心1分鐘，速度為16000g
• 加入xx微升  酶解液（Reagent D），混勻
• 放進(jìn)37℃恒溫水槽，孵育20分鐘
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心1分鐘，速度為16000g
• 加入xx微升  清理液（Reagent A），混勻
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心1分鐘，速度為16000g 
• 小心抽去上清液
• 加入xx微升  染色液（Reagent D），混勻細(xì)胞顆粒群
• 超聲處理100瓦，30%功率，15秒
• 在暗室里37℃培養(yǎng)箱里孵育30分鐘
• 移入到細(xì)胞流式儀測(cè)試管（可放進(jìn)4℃冰箱里待測(cè)）
• 即刻進(jìn)行細(xì)胞流式儀分析：波長(zhǎng)488nm氬離子激光出現(xiàn)綠色熒光（或488nm激發(fā)波長(zhǎng)，530nm散發(fā)波長(zhǎng)），觀察50000個(gè)細(xì)胞以上

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 孵育時(shí)，必須避免光照
• 建議細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行細(xì)胞流式儀分析。如果放進(jìn)4℃冰箱里待測(cè)，不要超過(guò)1周
• 細(xì)胞流式儀分析前，須混勻內(nèi)容物，或超聲處理，避免細(xì)胞成團(tuán)
• 細(xì)胞檢測(cè)量不得少于10000個(gè)
• 告知流式儀技術(shù)員有關(guān)細(xì)胞類(lèi)型
• 使用未經(jīng)染色的細(xì)胞進(jìn)行FSC與SSC設(shè)定，然后將染色細(xì)胞調(diào)整到未經(jīng)染色細(xì)胞的水平，包括FL1、FL2、FL3的PMT
• 建議設(shè)定：

Detector FSC E00  Gain：2

Detector FL1-A Voltage：400  Gain：4

流速：500/秒

• 本公司提供系列細(xì)胞周期分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰