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細(xì)胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法(SCHMORL)染色試劑盒

來源:銘修(上海)生物科技有限公司   2020年05月08日 11:21  

MB80070.1 v.A

 

 細(xì)胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法(SCHMORL)染色試劑盒產(chǎn)品說明書

(中文版)

 

主要用途

 

 細(xì)胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法(SCHMORL)染色試劑是一種旨在使用鐵還原法技術(shù),分析細(xì)胞樣品中晚期脂褐素沉積現(xiàn)象,從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到藍(lán)色表達(dá)的細(xì)胞作為細(xì)胞復(fù)制性衰老replicative senescence)的分子特征來識別和探測衰老細(xì)胞的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良SCHMORL方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于動物細(xì)胞的的晚期脂褐素檢測。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,顯色清晰。  

 

技術(shù)背景

 

細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機(jī)制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期,表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征,其中脂褐素顆粒聚集增多成為細(xì)胞衰老的特征性生物學(xué)標(biāo)記。脂褐素(lipofusin),又稱為“磨損(wear and tear)”色素,是一種細(xì)胞內(nèi)與年齡相關(guān)的棕黃色熒光胞漿顆粒色素,主要在有絲分裂后細(xì)胞的繼發(fā)性溶酶體內(nèi)。脂褐素常見于老年人的永恒性非分裂性組織細(xì)胞里,例如心臟、肝臟和神經(jīng)等,尤其在衰老誘導(dǎo)的細(xì)胞退變中聚集增多,特別是萎縮的組織。脂褐素來自于氧化的蛋白和脂質(zhì),成為細(xì)胞衰老中后期的獨(dú)立指征。脂褐素分為早期和晚期,晚期脂褐素作為較強(qiáng)還原性物質(zhì),在鐵離子的存在下,使鐵*(ferricyanide)轉(zhuǎn)化為亞鐵*(ferrocyanide),產(chǎn)生不可溶性普魯士藍(lán)(Prussian blue)產(chǎn)物,顯示藍(lán)色。

  

產(chǎn)品內(nèi)容

 

 清理液(Reagent A)       毫升

 固著液(Reagent B)  毫升

 染色液(Reagent C)  毫升

 酸性液(Reagent D)  毫升

產(chǎn)品說明書     1份

 

保存方式

 

保存在4冰箱里;  染色液(Reagent C)避免光照;有效保證3月

 

用戶自備

 

小型染色缸:用于細(xì)胞染色操作

光學(xué)顯微鏡:用于觀察染色后的細(xì)胞

 

 

 

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

操作一:細(xì)胞載玻片染色

 

  • 取出待測的細(xì)胞載玻片或細(xì)胞涂片 
  • 小心加上xx微升 清理液(Reagent A在載玻片上,鋪滿整個樣品表面
  • 小心移去載玻片上的 清理液(Reagent A
  • 小心加上xx微升 固著液(Reagent B在載玻片上,鋪滿整個樣品表面
  • 在室溫下孵育5分鐘
  • 小心移去載玻片上的 固著液(Reagent B
  • 小心加上xx微升 清理液(Reagent A),清洗樣品表面
  • 在室溫下孵育2分鐘
  • 小心移去載玻片上的 清理液(Reagent A
  • 小心加上xx微升 染色液(Reagent C在載玻片上,鋪滿整個樣品表面
  • 在室溫下孵育10分鐘
  • 小心移去載玻片上的 染色液(Reagent C
  • 小心將載玻片置入xx毫升 清理液(Reagent A的小型染色缸里 
  • 室溫下孵育2分鐘
  • 取出載玻片片,小心移去載玻片上的 清理液(Reagent A
  • 小心加上xx微升 酸性液(Reagent D在載玻片上,鋪滿整個樣品表面
  • 在室溫下孵育5分鐘
  • 小心移去載玻片上的 酸性液(Reagent D
  • 小心加上xx微升 清理液(Reagent A),清洗樣品表面
  • 小心移去載玻片上的 清理液(Reagent A
  • (選擇步驟)復(fù)染(建議使用 核固紅復(fù)染試劑盒——GMS40011)
  • 放上蓋玻片或封片(水相或中性樹脂)
  • 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察:脂褐素陽性細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色,細(xì)胞核呈現(xiàn)紅色(如果復(fù)染)

 

操作二:24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

 

  • 小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
  • 每孔加入xx微升 清理液(Reagent A,清洗生長中的細(xì)胞表面
  • 小心抽去每孔里的 清理液(Reagent A
  • 每孔加入xx微升 固著液(Reagent B覆蓋整個生長表面
  • 在室溫下孵育5分鐘
  • 小心抽去每孔里的 固著液(Reagent B
  • 每孔加入xx微升 清理液(Reagent A,清洗細(xì)胞表面
  • 在室溫下孵育2分鐘
  • 小心抽去 清理液(Reagent A
  • 每孔加入xx微 染色液(Reagent C,覆蓋整個生長表面
  • 在室溫下孵育10分鐘
  • 小心抽去 染色液(Reagent C
  • 每孔加入xx微升 清理液(Reagent A,清洗細(xì)胞表面
  • 在室溫下孵育2分鐘
  • 小心抽去 清理液(Reagent A
  • 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至15二次
  • 小心加上xx微升 酸性液(Reagent D,覆蓋整個生長表面
  • 室溫下孵育5分鐘
  • 小心抽去 酸性液(Reagent D
  • 小心加入xx微升 清理液(Reagent A
  • 小心抽去 清理液(Reagent A
  • (選擇步驟)復(fù)染(建議使用 核固紅復(fù)染試劑盒——GMS40011)
  • 小心加入xx微升 清理液(Reagent A
  • 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察:脂褐素陽性細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色細(xì)胞核呈現(xiàn)紅色(如果復(fù)染)

 

注意事項(xiàng)

 

  • 本產(chǎn)品為50次(細(xì)胞載玻片)和25次(124孔板)操作
  • 本產(chǎn)品還可以染色其它還原性物質(zhì),包括黑色素(melanin)、肝膽汁(liver bile)、腸嗜鉻細(xì)胞(enterochromaffin)等
  • 操作時,須戴手套
  • 使用時,避免污染母液
  •  染色液(Reagent C)避免光照
  • 試劑溶液在樣品表面時,避免有氣泡存在,同時確保鋪滿樣品表面
  • 染色完成后,即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察
  • 本公司提供系列細(xì)胞衰老分析試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色清晰 

 

 

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