MB80070.1 v.A
細(xì)胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法(SCHMORL)染色試劑盒產(chǎn)品說明書
(中文版)
主要用途
細(xì)胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法(SCHMORL)染色試劑是一種旨在使用鐵還原法技術(shù),分析細(xì)胞樣品中晚期脂褐素沉積現(xiàn)象,從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到藍(lán)色表達(dá)的細(xì)胞作為細(xì)胞復(fù)制性衰老(replicative senescence)的分子特征來識別和探測衰老細(xì)胞的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良SCHMORL方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于動物細(xì)胞的的晚期脂褐素檢測。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,顯色清晰。
技術(shù)背景
細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機(jī)制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期,表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征,其中脂褐素顆粒聚集增多成為細(xì)胞衰老的特征性生物學(xué)標(biāo)記。脂褐素(lipofusin),又稱為“磨損(wear and tear)”色素,是一種細(xì)胞內(nèi)與年齡相關(guān)的棕黃色熒光胞漿顆粒色素,主要在有絲分裂后細(xì)胞的繼發(fā)性溶酶體內(nèi)。脂褐素常見于老年人的永恒性非分裂性組織細(xì)胞里,例如心臟、肝臟和神經(jīng)等,尤其在衰老誘導(dǎo)的細(xì)胞退變中聚集增多,特別是萎縮的組織。脂褐素來自于氧化的蛋白和脂質(zhì),成為細(xì)胞衰老中后期的獨(dú)立指征。脂褐素分為早期和晚期,晚期脂褐素作為較強(qiáng)還原性物質(zhì),在鐵離子的存在下,使鐵*(ferricyanide)轉(zhuǎn)化為亞鐵*(ferrocyanide),產(chǎn)生不可溶性普魯士藍(lán)(Prussian blue)產(chǎn)物,顯示藍(lán)色。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液(Reagent A) 毫升
固著液(Reagent B) 毫升
染色液(Reagent C) 毫升
酸性液(Reagent D) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里; 染色液(Reagent C)避免光照;有效保證3月
用戶自備
小型染色缸:用于細(xì)胞染色操作
光學(xué)顯微鏡:用于觀察染色后的細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)步驟
操作一:細(xì)胞載玻片染色
- 取出待測的細(xì)胞載玻片或細(xì)胞涂片
- 小心加上xx微升 清理液(Reagent A)在載玻片上,鋪滿整個樣品表面
- 小心移去載玻片上的 清理液(Reagent A)
- 小心加上xx微升 固著液(Reagent B)在載玻片上,鋪滿整個樣品表面
- 在室溫下孵育5分鐘
- 小心移去載玻片上的 固著液(Reagent B)
- 小心加上xx微升 清理液(Reagent A),清洗樣品表面
- 在室溫下孵育2分鐘
- 小心移去載玻片上的 清理液(Reagent A)
- 小心加上xx微升 染色液(Reagent C)在載玻片上,鋪滿整個樣品表面
- 在室溫下孵育10分鐘
- 小心移去載玻片上的 染色液(Reagent C)
- 小心將載玻片置入xx毫升 清理液(Reagent A)的小型染色缸里
- 室溫下孵育2分鐘
- 取出載玻片片,小心移去載玻片上的 清理液(Reagent A)
- 小心加上xx微升 酸性液(Reagent D)在載玻片上,鋪滿整個樣品表面
- 在室溫下孵育5分鐘
- 小心移去載玻片上的 酸性液(Reagent D)
- 小心加上xx微升 清理液(Reagent A),清洗樣品表面
- 小心移去載玻片上的 清理液(Reagent A)
- (選擇步驟)復(fù)染(建議使用 核固紅復(fù)染試劑盒——GMS40011)
- 放上蓋玻片或封片(水相或中性樹脂)
- 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察:脂褐素陽性細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色,細(xì)胞核呈現(xiàn)紅色(如果復(fù)染)
操作二:24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色
- 小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
- 每孔加入xx微升 清理液(Reagent A),清洗生長中的細(xì)胞表面
- 小心抽去每孔里的 清理液(Reagent A)
- 每孔加入xx微升 固著液(Reagent B),覆蓋整個生長表面
- 在室溫下孵育5分鐘
- 小心抽去每孔里的 固著液(Reagent B)
- 每孔加入xx微升 清理液(Reagent A),清洗細(xì)胞表面
- 在室溫下孵育2分鐘
- 小心抽去 清理液(Reagent A)
- 每孔加入xx微升 染色液(Reagent C),覆蓋整個生長表面
- 在室溫下孵育10分鐘
- 小心抽去 染色液(Reagent C)
- 每孔加入xx微升 清理液(Reagent A),清洗細(xì)胞表面
- 在室溫下孵育2分鐘
- 小心抽去 清理液(Reagent A)
- 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至15二次
- 小心加上xx微升 酸性液(Reagent D),覆蓋整個生長表面
- 室溫下孵育5分鐘
- 小心抽去 酸性液(Reagent D)
- 小心加入xx微升 清理液(Reagent A)
- 小心抽去 清理液(Reagent A)
- (選擇步驟)復(fù)染(建議使用 核固紅復(fù)染試劑盒——GMS40011)
- 小心加入xx微升 清理液(Reagent A)
- 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察:脂褐素陽性細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色,細(xì)胞核呈現(xiàn)紅色(如果復(fù)染)
注意事項(xiàng)
- 本產(chǎn)品為50次(細(xì)胞載玻片)和25次(1個24孔板)操作
- 本產(chǎn)品還可以染色其它還原性物質(zhì),包括黑色素(melanin)、肝膽汁(liver bile)、腸嗜鉻細(xì)胞(enterochromaffin)等
- 操作時,須戴手套
- 使用時,避免污染母液
- 染色液(Reagent C)避免光照
- 試劑溶液在樣品表面時,避免有氣泡存在,同時確保鋪滿樣品表面
- 染色完成后,即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察
- 本公司提供系列細(xì)胞衰老分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
- 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
- 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色清晰
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