T24-GFP人膀胱移行細胞癌綠色標記細胞 培養步驟 含STR鑒定

細胞特性

1） 來源：腺癌，乳腺，胸水

2） 形態：上皮細胞樣

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

人乳腺癌細胞（熒光素酶）培養常見問題及其解決

1.如何選用特殊細胞系培養基？

培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，*MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養是一個好的開始。

2.（熒光素酶）何時須更換培養基？

視細胞生長密度而定， 或遵照細胞株基本數據上之更換時間，按時更換培養基即可。

3.可否使用與原先培養條件不同之培養基？

不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基， 若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基， 細胞大都無法立即適應， 造成細胞無法存活。

4.可否使用與原先培養條件不同之血清種類？

不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清， 在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

5.何謂FBS, FCS, CS, HS ?

FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 兩者都是指胎牛血清， FCS 乃錯誤的使用字眼， 請不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。

6.培養MCF-7+LUC人乳腺癌細胞（熒光素酶）時應使用5% 或10% CO2？或根本沒有影響？

一般培養基中大都使用HCO3-/CO3 2-/H+ 作為pH 的緩沖系統， 而培養基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養時應使用的CO2 濃度。當培養基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時，細胞培養時應使用10% CO2；當培養基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時， 則應使用5% CO2 培養細胞。

7.Hank's 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用，不需要CO2培養箱。原因是什么？Hank's 平衡鹽溶液(HBS)和Earle's平衡鹽溶液(EBS)有什么本質的功能差別？
收到細胞后應如何去正確的處理：

   您需要準備好細胞所要用到的培養基和相關試劑，雖然所有的貼壁，半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多，但是不同的實驗室培養條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在，也會導致對細胞處理不當，或者環境的不適應而造成細胞的死亡。

T24-GFP人膀胱移行細胞癌綠色標記細胞 培養步驟 含STR鑒定

       1.收到細胞，di一時間要鏡檢：觀察細胞形態是否正常，對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好，觀察細胞密度，有疑議及時咨提供細胞的技術人員。由于運輸的時間或者溫度的變化，很多貼壁細胞在盛滿培養基的瓶子里生長的狀態和平時會有點不一樣，主要是貼壁牢固問題。比如293T，平時貼壁就不是很牢，在裝滿的培養基瓶子里面，會發生大片的脫落，細胞聚集在一起，但是細胞生長還是正常的，通過離心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的貼壁生長。

       2.當通過上一步的觀察，細胞初步沒有任何問題時，進行下一步操作。當收到的細胞密達到80%左右時，則處理如下：棄除瓶中大部分培養基，僅保留5到10mL培養所需的常規培養基；或更換新鮮的培養基，置于培養箱中，隨后每天觀察。細胞在低于正常生長溫度情況下，會調整為靜止期，或者慢速生長期，必須恢復37度的環境至少3個小時左右，才能重新調整到接近對數生長期的狀態，在對數生長期進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率，和細胞的存活率。

       3.如果經di一步觀察發現細胞密度超過90%，并且細胞狀態很好時，則復溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應依據不同的細胞而定。對于生長比較快，狀態穩定，不易受外界影響的細胞可以一次多傳幾瓶；對于生長較慢，細胞比較薄，狀態容易波動的細胞類型，一次少傳些，保證每瓶細胞密度大些，便于穩定生長。至于一些比較陌生的細胞，di一次處理也可以依照第二種情況。
HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles (2.2 g/L)中比在Hanks (0.35 g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織，需要用Eagles液，。如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。

一、售前
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二、售后
         收到細胞7天內出現狀態不佳等情況請及時反饋，會有技術同步指導操作協助解決，如仍未養活免費重發。建議及時保種，有備無患！
 
三、細胞生長條件：
培養條件   
GIBCO(培養基90% +10%FBS)
溫度                   
                    37℃
空氣條件  
5% CO2，,95% AIR
傳代方法
1:2傳代，2~3天換液
凍存條件
90%FBS+10%DMSO
 
四、細胞收到后處理
    細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿*培養液并封好瓶口是細胞運輸的好辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養液，懸浮細胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。

 
五、細胞培養步驟
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
 
1、貼壁細胞，傳代參考如下：
①. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
②. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
③. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
 
④. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。操作步驟：
請收到細胞后，在倒置鏡下(合適的是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，換 10ml新鮮培養液后繼續培養。
（二） (二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：
1.棄去培養液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，倒放于37℃培養箱1-3分鐘預熱，之后翻轉培養瓶10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量*培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加*培養基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養瓶中。
如果沒有特別說明，收到細胞后的*次傳代一般是一傳二。