SW620-LUC人結(jié)腸癌熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 處理方法

【背景資料】 見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品來(lái)源】 細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)內(nèi)外著名大學(xué)建系
"公司提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細(xì)胞特性，一般細(xì)胞培養(yǎng)PBS量是10%，如果出現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)不良情況，可以提高PBS量到15%，SHEE人永生化食管上皮細(xì)胞待細(xì)胞穩(wěn)定后，調(diào)回PBS量10%，對(duì)于初次實(shí)驗(yàn)者，一般細(xì)胞培養(yǎng)，都需要加入雙抗防止細(xì)胞污染，細(xì)胞匯合度達(dá)到90%，我們開(kāi)始寄送，這樣可以保持細(xì)胞收到時(shí)，良好的細(xì)胞活力。
一、售前
         上海琛藝實(shí)業(yè)專(zhuān)業(yè)為國(guó)內(nèi)科研提供高品質(zhì)細(xì)胞和優(yōu)質(zhì)服務(wù)，QC檢測(cè)合格后發(fā)貨保證細(xì)胞狀態(tài)良好，發(fā)貨前保證質(zhì)量。
 
二、售后
         收到細(xì)胞7天內(nèi)出現(xiàn)狀態(tài)不佳等情況請(qǐng)及時(shí)反饋，會(huì)有技術(shù)同步指導(dǎo)操作協(xié)助解決，如仍未養(yǎng)活免費(fèi)重發(fā)。建議及時(shí)保種，有備無(wú)患！
 
三、細(xì)胞生長(zhǎng)條件：
培養(yǎng)條件   
GIBCO(培養(yǎng)基90% +10%FBS)
溫度                   
                    37℃
空氣條件  
5% CO2，,95% AIR
傳代方法
1:2傳代，2~3天換液
凍存條件
90%FBS+10%DMSO
 
四、細(xì)胞收到后處理
    細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿(mǎn)*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)暮棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細(xì)胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

SW620-LUC人結(jié)腸癌熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 處理方法
 
五、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
 
1、貼壁細(xì)胞，傳代參考如下：
①. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
②. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
③. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
 
④. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。操作步驟：
請(qǐng)收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(好在是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
（一）如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿(mǎn)，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。
（二） (二)如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿(mǎn)，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1.棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。
如果沒(méi)有特別說(shuō)明，收到細(xì)胞后的*次傳代一般是一傳二。
 

其他細(xì)胞如下：

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