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OVCaR-3-LUC人卵巢癌熒光素酶標記細胞 培養(yǎng)步驟

來源:上海琛藝實業(yè)有限公司   2020年04月15日 12:23  

上海琛藝實業(yè)有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進細胞上千株,其中人的已通過STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購。。。。。。
產(chǎn)品名稱:OVCaR-3-LUC人卵巢癌熒光素酶標記細胞 培養(yǎng)步驟
特點:細胞代數(shù)為4代以內,細胞耐藥倍數(shù)8倍以上;
包裝:內層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運輸方式:快遞運輸
售后:收到細胞后12天,如發(fā)現(xiàn)細胞有質量問題(如污染,死亡,快遞運輸?shù)仍颍r,應出具書面質量問題報告并及時通知銷售人員,我們將盡快為您解決!
1.慢病毒包裝部分
1. 質粒共轉染細胞:轉染前一天,293T在10cm培養(yǎng)盤中的細胞達到90%,胰酶消化后,1:3傳入新10cm培養(yǎng)盤中。轉染時,細胞在培養(yǎng)盤中密度達到80%。采用脂質體PEI轉染法使編碼慢病毒包膜蛋白的質粒VSV G, Packaging Mix以及構建的Gluc或Mluc質粒15µg共轉染。6h后換新鮮DMEM培養(yǎng)基。
2.提取病毒上清:轉染48-72hours后,將含有病毒液的培養(yǎng)基轉移到15ml離心管中,在低溫4攝氏度條件下,3000rpm,離心10min去除片狀沉淀的細胞碎片。
3.濃縮病毒:將病毒上清用0.45um濾器過濾至濃縮離心管中,2000rpm,4℃,15min離心。濃縮液收集于500µl離心管中,-80℃保存。

OVCaR-3-LUC人卵巢癌熒光素酶標記細胞 培養(yǎng)步驟
1.慢病毒感染&篩選
1.感染前一天(Day1),消化4T1細胞并計數(shù),將細胞鋪于24孔板中(以便在感染前細胞達到30%-50%的匯合度,37°C過夜孵化細胞。
2.(Day2) 解凍低溫保存的慢病毒液,并且制備1:2病毒稀釋液200µl加入細胞中。
3.向每孔加入Polybrene達到終濃度6ug/ml,晃勻孔板,37度孵化過夜。
4.(Day3)移去含有慢病毒的培養(yǎng)基,加入500µl*培養(yǎng)基。
5.(Day4)換液,加入300µg/ml  Hygromycin(Sigma)來選擇穩(wěn)定感染的細胞克隆。
6.(Day4-7),每24h換液,300µg/ml Hygromycin(Sigma)來選擇穩(wěn)定感染的細胞克隆。
維持培養(yǎng)。
7.(Day8-12)細胞逐漸由24孔板傳入6孔板、6cm盤和10cm盤中100µg/ml Hygromycin維持培養(yǎng)。
8. 4T1-Gluc/Mluc細胞系鑒定: 取5×104細胞,用Passive Lysis裂解液裂解,加入熒光素酶作用底物,將轉染質粒的細胞與陰性,陽性對照共同進行單報告基因檢測。GFP和mCherry表達通過熒光顯微鏡觀察。
 
?培養(yǎng)條件 :置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中,用含10%胎牛血清(FBS;    Hyclone, Tauranga, New Zealand)和1%雙抗(100 U/ ml青霉素和100 μg/ ml鏈霉素,Hyclone, Logan, UT, USA)的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng),培養(yǎng)一天(密度大概80%)按照1:3的比例傳代。
?細胞傳代所需時間:1天/代 
?篩選標記維持壓力和選擇壓力:Hygromycin 100ug/ml 和300ug/ml 。
?體外實驗數(shù)據(jù):
1.4T1-Gluc 和4T1-Mluc熒光顯微鏡照片(100×):
2.細胞裂解液的發(fā)光值,數(shù)據(jù)—化學發(fā)光儀(Berthold Lumat LB 9501)檢測。
HuUMSCs-11細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:第三代
HepAD38細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
Li-7細胞系;細胞傳代方法:1:2傳代;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁生長 ;細胞背景資料:人肝癌細胞株。這株細胞從裸鼠體外移植瘤中建立。
Mahlavu細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:肝癌;女性
SNU475細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:肝癌;男性
NCI-H2081細胞系;細胞傳代方法:隨細胞的密度而增加;細胞形態(tài)特性:聚團懸浮;細胞生長特性:懸浮生長;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
PC-12細胞系;細胞傳代方法:消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿;細胞形態(tài)特性:多角形;細胞生長特性:貼壁生長;細胞背景資料:該細胞系來自能移植的雄性大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤。這些細胞表達神經(jīng)生長因子(NGF)受體。NGF可誘導產(chǎn)生神經(jīng)表型。這些細胞不合成。
95D細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:巨細胞肺癌
YTMLC-90細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:肺鱗癌;男性
HEP 3B細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:肝癌;男性
TB 1 LU細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:肺
HS578T細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
MDBK(NBL-1)細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:腎;自發(fā)永生;雄性
NCI-H2052[H2052]細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
NRK49F細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
MCF-12A細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:非致瘤性乳腺上皮細胞;女性
3T3-Swissalbino細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
WILL-2細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:懸浮;細胞背景資料:彌漫大B淋巴瘤;女性
NUTU-19細胞:大鼠卵巢癌細胞
RD細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:4傳代,3-4天換液1次;細胞形態(tài)特性:梭型和大的多核細胞;細胞生長特性:貼壁生長;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
MC3T3-E1 Subclone 14細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:成纖維細胞樣;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:該細胞是從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細胞系中分離出一系列亞克隆。從含抗壞血酸培養(yǎng)基生長的成骨細胞中選擇高或低成骨細胞分化、礦化的亞克隆。 MC3T3亞克隆4(ATCC CRL-2593)和MC3T3亞克隆14(ATCC CRL-2594)在抗壞血酸和3到4mM無機磷酸鹽中生長表現(xiàn)出高水平的成骨細胞分化。 它們10天后形成一個礦化良好的細胞外基質(ECM)。MC3T3亞克隆24(ATCC CRL-2594)和MC3T3亞克隆30(ATCC CRL-2596)在抗壞血酸中生長表現(xiàn)出很差的成骨細胞分化
J-111細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:懸浮;細胞背景資料:單核細胞白血病
SGC-790細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
NCI-H1869細胞系;細胞傳代方法:1:3-1:4傳代;每周換液2次;細胞形態(tài)特性:上皮細胞;細胞生長特性:貼壁生長;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
CL-34細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
TOV-112D細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代,3-4天換液1次;細胞形態(tài)特性:上皮細胞;細胞生長特性:貼壁生長;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
OE-19細胞系;細胞傳代方法:1:2傳代;細胞形態(tài)特性:上皮樣;細胞生長特性:貼壁生長;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
CHO-dhFr-細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
JVM-3細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:懸浮;細胞背景資料:慢性髓白血病;女性
WILL-2細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:懸浮;細胞背景資料:彌漫大B淋巴瘤;女性
NCI-H1385細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
HuT78細胞系;細胞傳代方法:維持細胞濃度在0.5—8×105viablecells/ml之間;每周換液3次;細胞形態(tài)特性:淋巴母細胞樣;細胞生長特性:懸浮生長;細胞背景資料:該細胞可產(chǎn)生IL-2,TNF-α;表達IL-2受體。
WM-266-4細胞系;細胞傳代方法:1:2傳代;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁生長;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
CHO細胞系;細胞傳代方法:1:3傳代,3-4天換液一次;細胞形態(tài)特性:上皮樣;細胞生長特性:貼壁生長;細胞背景資料:1957年,PuckTT從成年中國倉鼠卵巢的活檢組織建立了CHO細胞;廣泛用于生物制品的表達。
PBL細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:懸浮;細胞背景資料:外周血淋巴細胞
DOhh2細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:懸浮;細胞背景資料:人彌漫大B淋巴瘤;男性
CTLA4 Ig-24細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
Caco2細胞系;細胞傳代方法:1:2傳代;細胞形態(tài)特性:上皮樣;細胞生長特性:貼壁生長;細胞背景資料:此細胞株分離自一個原發(fā)性結腸癌。當細胞長滿時,表現(xiàn)出典型的腸細胞分化的特征。Caco-2細胞表達維生素A酸結合蛋白I和視黃醇結合蛋白II,角蛋白陽性。
NUTU-19細胞:大鼠卵巢癌細胞
M619細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:脈絡膜黑色素瘤;女性
NCI-H524細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:圓形細胞;細胞生長特性:懸浮生長;細胞背景資料:該細胞1982年建系,源自非小細胞肺癌男性患者的轉移淋巴結。
NCI-H23細胞系;細胞傳代方法:1:3傳代;3-4天1次;細胞形態(tài)特性:上皮樣;細胞生長特性:貼壁生長;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
HUVSMC細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:臍靜脈平滑肌
RC92A細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:前列腺癌;HGNC-TERT轉化;男性
DMS79細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:半貼壁;細胞背景資料:小細胞肺癌;男性
HOPC-os細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
EU-4細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:懸浮;細胞背景資料:兒童急性髓系白血病
NG108-15[108CC15]細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
KMST-6細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:胚成纖維細胞;女性
HNE2細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
Farage細胞系;細胞傳代方法:1:3傳代,2-3天傳一代;細胞形態(tài)特性:淋巴母細胞樣;細胞生長特性:懸浮生長;細胞背景資料:Farage細胞源于一名患有彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)白人女性的活檢淋巴組織,由HBen-Bassat建系。經(jīng)IL-4處理,該細胞CD21,CD22,CD54和CD58表達上調,而CD21,CD22,andCD38表達下調。
SNU-251細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:卵巢內膜癌;腹水轉移;女性
NCI-H23細胞系;細胞傳代方法:1:3傳代;3-4天1次;細胞形態(tài)特性:上皮樣;細胞生長特性:貼壁生長;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
LS180細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
NCI-H2085[H2085]細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分;細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
FHL124細胞系;細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次;細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書;細胞生長特性:貼壁;細胞背景資料:晶狀體上皮;自發(fā)永生

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