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H2S 含量測定試劑盒說明書
注意：正式測定之前選擇預期差異大的樣本做預實驗
規格: 100T/96S
產品內容：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 1mL×1 管，4℃避光保存。
標準品：粉劑 3mg×1 管，4℃避光保存
產品說明：
微量法
H2S 是一種新型氣態信號分子，存在于腦內的神經遞質，生理濃度的 H2S 對神經系統海馬的
長時程增強功能具有重要的調節作用，并對自發性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過程發揮著重要的病理生理效應。
H2S 與醋酸鋅、N, N-二甲基對苯二胺和硫酸鐵銨等反應生成亞甲基藍，亞甲基藍在 665nm 處有大吸收峰，通過測定其吸光值可計算 H2S 含量。
需自備的儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計或酶標儀、微量比色皿或96孔板、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品處理：
a. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL
提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
b. 細菌、真菌：按照細胞數量（10 4 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。
c. 血清（漿）：直接測定。
二、測定步驟： （取 1.5ml 離心管，按照下表操作）
| 空白管 | 測定管 | 標準管 |
樣品（μL） |
| 50 | 50 |
蒸餾水（μL） | 50 |
|
|
d. 臨用前將標準品加入1ml試劑一充分溶解則為12.5μmol /mL H2S標準品溶液，稀釋100倍后為0.125μmol /mL標準品溶液
試劑一（μL） | 50 | 50 | 50 |
充分震蕩混勻 | |||
| |||
試劑二（μL） | 50 | 50 | 50 |
充分震蕩混勻 | |||
試劑三（μL） | 50 | 50 | 50 |
充分震蕩混勻 | |||
試劑四（μL） | 10 | 10 | 10 |
12000rpm，4℃，離心 10min，取200μl上清混勻，25℃靜置20min，于比色皿中，測定665nm吸光值，記為A空白、A測定、A標準。 | |||
三、H2S 含量計算公式：
- 按蛋白濃度計算
H2S含量（μmol /mg prot）=0.125×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白) ÷Cpr
- 按樣本質量計算
H2S含量（μmol /g）=0.125×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白) ÷W
- 按細胞數量計算
H2S含量（μmol /104 cell）=0.125×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管) ÷細胞數量
- 按照液體體積計算
H2S含量（μmol /mL）=0.125×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)
注意事項：如樣本OD值大于標準品OD，可稀釋樣本或增大標準品濃度
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