本方法(IDEXX HerdChek BSE EIA test)由美國IDEXX公司開發研制,是一種快速簡捷的酶聯免疫測定方法,2004年通過美國和歐盟認證。
該方法的原理是將牛腦組織制成勻漿懸液,用稀釋液處理組織懸液,將處理后的腦組織懸液加入到包被有能選擇性地捕獲PrPSc的化學聚合物(英國Microsens公司技術)的微孔板中,室溫孵育,洗滌后加入辣根過氧化物酶標記的針對PrP分子保守區的單抗,TMB顯色,測定OD值,判斷結果。
本方法的敏感性為100%,特異性為99.99%。本方法的特點在于不需要蛋白酶K消化,無需離心,無需特別溫度的孵育,所有步驟都在室溫下進行,4.5h內出結果,無需豐富的實驗經驗,實驗廢物少,所需實驗空間小。
瘋牛病的IDEXXEIA檢測方法主要步驟如下。
(1)樣品準備 收集樣品(腦閂部組織),勻漿,用稀釋液稀釋勻漿液。
(2)捕獲PrPSc將稀釋好的勻漿液加入到BSE病原捕獲板中,由seprion親和配體捕獲。
(3)添加調節緩沖液 洗去捕獲板中未結合的樣品,加入調節緩沖液并孵育,使捕獲的PrPSc變性,以便充分暴露抗原位點。
(4)添加HRP標記的單抗 洗去調節緩沖液,加入HRP標記的單抗并孵育。標記了HRP的PrP單抗結合上PrPSc。
(5)添加底物和終止液 洗去未結合的單抗,加入底物并孵育。當有陽性時出現藍色,滴加HCl終止液終止反應,顏色則變成了黃色。
(6)讀值和分析 用酶標儀讀板,數值用IDEXXxChek軟件分析。
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