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家禽組蛋白H3K9檢測試劑盒實驗操作步驟

來源:上海研生實業有限公司   2020年03月04日 15:29  

家禽組蛋白H3K9檢測試劑盒操作步驟:

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

20pg/ml  5 號標準品  150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

10pg/ml  4 號標準品  150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

5pg/ml  3 號標準品  150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2.5pg/ml  2 號標準品  150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

1.25pg/ml  1 號標準品  150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2.  加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同) 、標準孔、待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl, 待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍) 。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.  溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復 5 次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

7.  溫育:操作同 3。

8.  洗滌:操作同 5。

9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色) 。

11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值) 。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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