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這些有色產(chǎn)物對570nm、440nm光的吸收強度與洗脫出來的各氨基酸的濃度(或含量)之間的關(guān)系符合比耳定律，可與標準氨基酸比較作定性和定量測定。
工作原理
測定原理是利用樣品各種氨基酸組分的結(jié)構(gòu)不同、酸堿性、極性及分子大小不同，在陽離子交換柱上將它們分離，采用不同pH值離子濃度的緩沖液將各氨基酸組分依次洗脫下來，再逐個以另流路的茚三酮試劑混合，然后共同流至螺旋反應(yīng)管中，于一定溫度下(通常為115~120℃)進行顯色反應(yīng)，形成在570nm有大吸收的藍紫色產(chǎn)物。其中的羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)生成黃色產(chǎn)物，其大吸收在440nm。
說明
① 顯色反應(yīng)用的茚三酮試劑，隨著時間推移發(fā)色率會降低，故在較長時間測樣過程中應(yīng)隨時采用已知濃度的氨基酸標準溶液上柱測定以檢驗其變化情況。
② 近年出現(xiàn)的采用反相色譜原理制造的氨基酸分析儀，可使蛋白質(zhì)水解出的17 種氨基酸在12min 內(nèi)完成分離，且具有靈敏度高(小檢出量可達1pmol)、重現(xiàn)性好以及一機多用等優(yōu)點。
工作原理
測定原理是利用樣品各種氨基酸組分的結(jié)構(gòu)不同、酸堿性、極性及分子大小不同，在陽離子交換柱上將它們分離，采用不同pH值離子濃度的緩沖液將各氨基酸組分依次洗脫下來，再逐個以另流路的茚三酮試劑混合，然后共同流至螺旋反應(yīng)管中，于一定溫度下(通常為115~120℃)進行顯色反應(yīng)，形成在570nm有大吸收的藍紫色產(chǎn)物。其中的羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)生成黃色產(chǎn)物，其大吸收在440nm。
說明
① 顯色反應(yīng)用的茚三酮試劑，隨著時間推移發(fā)色率會降低，故在較長時間測樣過程中應(yīng)隨時采用已知濃度的氨基酸標準溶液上柱測定以檢驗其變化情況。
② 近年出現(xiàn)的采用反相色譜原理制造的氨基酸分析儀，可使蛋白質(zhì)水解出的17 種氨基酸在12min 內(nèi)完成分離，且具有靈敏度高(小檢出量可達1pmol)、重現(xiàn)性好以及一機多用等優(yōu)點。
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