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TE354.T細(xì)胞|TE354.T人皮膚基底細(xì)胞癌 含STR

來(lái)源:上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司   2019年10月22日 10:48  

上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司經(jīng)過(guò)數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進(jìn)細(xì)胞上千株,其中人的已通過(guò)STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購(gòu)。。。。。。

【中文名稱】TE354.T細(xì)胞|TE354.T人皮膚基底細(xì)胞癌 含STR

【背景資料】 見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品來(lái)源】 細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)內(nèi)外大學(xué)建系

"公司提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細(xì)胞特性,一般細(xì)胞培養(yǎng)FBS

量是10%,如果出現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)不良情況,可以提高FBS量到15%, 細(xì)胞待細(xì)胞穩(wěn)定后,調(diào)回FBS量10%,對(duì)于初次實(shí)驗(yàn)者,一般細(xì)胞培養(yǎng),都需要加入雙抗防止細(xì)胞污染,細(xì)胞匯合度達(dá)到90%,我們開(kāi)始寄送,這樣可以保持細(xì)胞收到時(shí),良好的細(xì)胞活力。

 

  • 售前
        上海琛藝專業(yè)為國(guó)內(nèi)科研提供高品質(zhì)細(xì)胞和服務(wù),QC檢測(cè)合格后發(fā)貨保證細(xì)胞狀態(tài)良好,發(fā)貨前保證質(zhì)量。
     
    二、售后
        收到細(xì)胞7天內(nèi)出現(xiàn)狀態(tài)不佳等情況請(qǐng)及時(shí)反饋,會(huì)有技術(shù)同步指導(dǎo)操作協(xié)助解決,如仍未養(yǎng)活免費(fèi)重發(fā)。建議及時(shí)保種,有備無(wú)患!
     
    三、細(xì)胞生長(zhǎng)條件:

 

細(xì)胞系使用說(shuō)明書(shū)

細(xì)胞名稱

TE354.T細(xì)胞|TE354.T人皮膚基底細(xì)胞癌 含STR

細(xì)胞背景

在PEG脅迫下,將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細(xì)胞與抗硫鳥(niǎo)嘌呤的A549克隆株融合,構(gòu)建了人臍靜脈細(xì)胞株, EA.hy926。融合子在HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)并以八因子相關(guān)抗原篩選。EA.hy926已經(jīng)過(guò)100次以上的群體倍增(PDLs)。電鏡照片顯示W(wǎng)eibel-Palade小體的細(xì)胞質(zhì)分布以及組織特異性的細(xì)胞器,分化的內(nèi)皮細(xì)胞特性如血管生成,體內(nèi)平衡/血栓形成,血壓及炎癥反應(yīng)。

貨號(hào)

CY1002

種屬

細(xì)胞用途

僅供科研使用

生長(zhǎng)特性

貼壁

培養(yǎng)

培養(yǎng)基:90%DMEM(高糖)+10%FBS

溫度:37℃     氣相:95%空氣,5%二氧化碳

細(xì)胞特性

 

1)  來(lái)源:體細(xì)胞融合細(xì)胞

2)  形態(tài):內(nèi)皮細(xì)胞樣,貼壁生長(zhǎng)

3)  含量:>1x106 個(gè)/mL

4)  污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5)  規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1.      棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2.      加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.      按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.      收到細(xì)胞后傳代推薦將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,建議凍存一支備用,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為例;

1     細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2     1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

保存

凍存條件:90%*培養(yǎng)液+10%DMSO

(備注:建議使用本公司的冷凍液(H-W-100),用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞,不能預(yù)熱后使用。)

保存條件:液氮存儲(chǔ)

常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

1.培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:細(xì)胞極大可能會(huì)污染,所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2.收到細(xì)胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加 10%的血清(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間長(zhǎng)不宜超過(guò) 72 小時(shí))

3.細(xì)胞漂浮:培養(yǎng)瓶不開(kāi)封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時(shí)后觀察,如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,表明細(xì)胞活力正常,剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉,留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度80%,進(jìn)行消化傳代;如細(xì)胞還是不貼壁,將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo),直到問(wèn)題解決。

 

二、 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
<1>細(xì)胞培養(yǎng)
① 細(xì)胞請(qǐng)于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),大部分細(xì)胞是37℃,5% CO2,濕度100%環(huán)境下培養(yǎng)的。有極少部分細(xì)胞培養(yǎng)條件不一致,請(qǐng)仔細(xì)閱讀相應(yīng)的細(xì)胞說(shuō)明書(shū),使用正確的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件;
② 細(xì)胞于培養(yǎng)瓶或皿中培養(yǎng),加入適量說(shuō)明書(shū)上標(biāo)注的細(xì)胞相應(yīng)*培養(yǎng)基(一般液面高度2-3mm即可)。
<2>細(xì)胞傳代(以下步驟適用于10cm皿)
① 細(xì)胞培養(yǎng)至密度達(dá)80%以上時(shí)即可傳代,先將細(xì)胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好,其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄;
② 培養(yǎng)皿加入2-3mL無(wú)菌PBS,輕輕晃動(dòng)皿,使PBS浸洗到皿底所有部位,PBS吸干舍棄;
③ 加入1mL胰酶,輕輕晃動(dòng)皿,使胰酶浸沒(méi)到皿底所有部位,將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化;
④ 3min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞不再貼壁,即可加入di一步收集的培養(yǎng)基混勻;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止;
⑤ 將細(xì)胞懸液均勻分成幾份,分別加入不同培養(yǎng)皿中,補(bǔ)加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
<3>相關(guān)問(wèn)題
① 部分細(xì)胞在傳代后時(shí),會(huì)有以下現(xiàn)象:細(xì)胞內(nèi)會(huì)有黑色小點(diǎn)、細(xì)胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細(xì)胞或者細(xì)胞長(zhǎng)的極慢。出現(xiàn)以上現(xiàn)象時(shí),可以咨詢本公司技術(shù)人員此現(xiàn)象是否正常及相關(guān)處理方式,不要頻繁換液,大多數(shù)細(xì)胞1周換液2-3次即可。
② 細(xì)胞碎片較多、背景較臟時(shí),貼壁細(xì)胞用PBS漂洗兩次、懸浮細(xì)胞打散后低速離心(900rpm,3min)能有效改善。
③ 傳代比例建議1:2-1:3,長(zhǎng)得比較快的細(xì)胞可以1:3,比較慢的按1:2傳代。傳代后,建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基,會(huì)有大量細(xì)胞碎片甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡的風(fēng)險(xiǎn)。
④ 細(xì)胞狀態(tài)不好或者生長(zhǎng)極慢的時(shí)候,可以通過(guò)增加血清濃度調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)及生長(zhǎng)速度。
⑤ 請(qǐng)不要隨意更換培養(yǎng)基,因?qū)嶒?yàn)需要,可以逐步馴化。
懸浮傳代:混勻細(xì)胞,收集細(xì)胞懸液900-1000rpm離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞,再離心后,用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時(shí)碎片比較少,傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗一次。

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