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C8-D1A細胞|鼠小腦細胞C8-D1A

來源:上海琛藝實業有限公司   2019年10月16日 15:39  

上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發、生產、經營為一體的專業化生物工程公司。公司新引進細胞上千株,其中人的已通過STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購。。。。。。

產品名稱:C8-D1A細胞|鼠小腦細胞C8-D1A

包裝:內層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運輸方式:快遞運輸
售后:收到細胞后12天,如發現細胞有質量問題(如污染,死亡,快遞運輸等原因)時,應出具書面質量問題報告并及時通知銷售人員,我們將盡快為您解決!

C8-D1A細胞|鼠小腦細胞C8-D1A


  •  
  • 三、細胞生長條件:

 

  • 組成:

組份

數目

細胞

 1 T-25瓶

細胞說明書

一份

  • 細胞簡介:

生長特性:

貼壁生長

 

細胞來源:

從ATCC/中科院/協和醫院等地引進

培養條件:

培養基:90%1640培養基 +10%FBS(推薦BI  -04-001-1ACS*胎牛血清)

氣相:空氣95%,二氧化碳5%

溫度:37℃

培養:

  • 貼壁細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,將其平躺置于培養箱中進行2-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養基并置于細胞培養箱中培養,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代;

2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進行傳代,第yi次傳代比例為1:2。

3傳代步驟:將0.25%含EDTA胰酶置于37°預熱,倒掉培養瓶中的培養基,往培養瓶中加入1mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預熱好的胰酶,置于37°孵育消化(第yi次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為*消化時間,記錄*消化時間,以便于下次消化),消化好后加入1ml*培養基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后收集細胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養基重懸細胞,進行傳代。

 

二、懸浮細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,然后置于無菌操作臺,打開瓶口,輕輕吹打后,將其中的細胞懸液轉移到離心管中,然后1200rpm離心3min,去上清;

2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鮮培養基,然后將其置于細胞培養箱中培養,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液(離心后去舊液,加入新鮮培養基);

3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時,對其進行傳代,第yi次傳代比例為1:2(離心后平均分成兩瓶培養)。

 

凍存細胞接收后的處理:

1.干冰運輸,收到細胞后立即轉入-80℃冰箱短暫中轉或直接復蘇;
2.收到細胞后,若發現干冰已經*揮發、凍存管瓶蓋破裂脫落,請立即拍照后與我們聯系。

 

復蘇細胞接收后的處理:

1.收到細胞后,請首先檢查培養瓶是否破損或漏液,培養液是否混濁,如有漏液及培養液混濁情況請立即拍照把圖片發給我們。
2.75%酒精消毒瓶身后放培養箱中靜置4-6h后,在顯微鏡下確認細胞狀態并拍照100倍和200倍的照片,若有貼壁細胞脫落,可收集上清離心,將沉淀用新的培養基接種至新的培養瓶或培養皿中。
3.建議收到當天不要消化處理,如果細胞長滿90%,可選擇傳代處理。
4.如您收到細胞3天內沒有反饋相關問題,出現的細胞問題將不提供免費重發服務。

 

細胞培養方法:

1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

 

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