今天,將為您帶來(lái)梯度方法開(kāi)發(fā)攻略②:梯度條件的影響因素,共同探討在梯度條件下需要注意哪些因素。
1. 不同色譜柱的分離選擇性
2. 梯度斜率
3. 初始有機(jī)相比例
4. 梯度拐點(diǎn)設(shè)置
5. 流動(dòng)相或柱溫優(yōu)化
不同色譜柱的分離選擇性
不同色譜柱的疏水性、表面極性存在差異,因此化合物的出峰時(shí)間也會(huì)受到影響,我們可以根據(jù)化合物的特性選擇合適的色譜柱。
梯度斜率
梯度斜率 N =Δ B% / tGra (% / min)
梯度斜率越大,洗脫速度越快,但分離度同時(shí)下降。
初始有機(jī)相比例
初始比例 Binitial %,通常對(duì)于早出峰的化合物保留分離影響大。
梯度拐點(diǎn)設(shè)置
合理設(shè)置梯度拐點(diǎn),可以有效地縮短分析時(shí)間。
流動(dòng)相或柱溫優(yōu)化
溫度從35℃升高到45℃,增強(qiáng)了化合物的分離度。
調(diào)整流動(dòng)相比例,可以有效縮短分離時(shí)間。
通過(guò)更換色譜柱柱長(zhǎng)、粒徑、流速、來(lái)獲得快速分析結(jié)果。
梯度分析中需要注意的幾個(gè)問(wèn)題
1)梯度條件需要進(jìn)行充分洗脫;
2)梯度進(jìn)行完畢需要重新平衡回初始狀態(tài),才能進(jìn)行下一個(gè)梯度序列的分析;
3)梯度條件會(huì)造成基線漂移,需要進(jìn)空白樣確定梯度基線變化;
4)注意觀察壓力變化情況;
5)當(dāng)流動(dòng)相中含有緩沖鹽時(shí),在梯度有機(jī)相高點(diǎn)不得鹽析。
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